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乳酸菌和酵母菌復(fù)合發(fā)酵南瓜汁工藝研究

2017-06-20 23:10:14      點擊:

導(dǎo)讀

我國南瓜種植面積大、產(chǎn)量高,但大多被直接食用,附加值不高。近年來,利用益生菌發(fā)酵果蔬汁飲品的研究日益增多。發(fā)酵果蔬汁與普通果蔬汁相比,不但能夠增加果蔬制品的營養(yǎng)保健功能,改善果蔬制品的風(fēng)味,而且有利于延長食品保質(zhì)期,提高經(jīng)濟(jì)效益。目前,用于發(fā)酵果蔬汁的益生菌以乳酸菌為主,有保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、雙歧桿菌等。以多種乳酸菌和酵母菌共同發(fā)酵的研究還較少。賀銀鳳通過對傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品開菲爾及內(nèi)蒙酸馬奶酒的研究發(fā)現(xiàn),酵母菌和乳酸菌之間有共生關(guān)系。葛磊采用先乳酸菌后酵母菌的發(fā)酵方式開發(fā)了全燕麥發(fā)酵飲料。本研究以南瓜汁為原料,選取前期篩選獲得的3株優(yōu)質(zhì)的乳酸菌與釀酒酵母共同接種于南瓜汁中進(jìn)行發(fā)酵試驗,通過發(fā)酵工藝參數(shù)的優(yōu)選為開發(fā)有活性的南瓜功能飲料提供參考。

1材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料

南瓜、馬鈴薯、大豆;乳酸菌L.c、L.p、L.r;釀酒酵母SY。

1.1.2 設(shè)備

LX-B35L型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌鍋;DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱;BSA1245-CW分析天平;YT-CJ-1N型超凈工作臺;XW80A漩渦混合器;FE20實驗室pH計等。

1.1.2 設(shè)備

LX-B35L型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌鍋;DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱;BSA1245-CW分析天平;YT-CJ-1N型超凈工作臺;XW80A漩渦混合器;FE20實驗室pH計等。

1.2 方法

1.2.1 種子培養(yǎng)基的優(yōu)化

以南瓜漿作為乳酸菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,選取葡萄糖補充碳源,加入豆?jié){補充氮源,添加碳酸鈣起緩沖作用,因為碳酸鈣可以中和乳酸菌產(chǎn)生的乳酸,避免培養(yǎng)基pH過低,更好地促進(jìn)乳酸菌的生長。乳酸菌L.p、L.c、L.r以1∶1∶1(體積比)的接種量接種于培養(yǎng)基中,接種量為3%,在36℃下發(fā)酵12h。采用L9(34)正交試驗設(shè)計進(jìn)行試驗,對乳酸菌群的種子培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。試驗因素與水平見表1。

1.2.2 發(fā)酵工藝參數(shù)的優(yōu)化

為確定南瓜汁發(fā)酵的最佳條件,選擇發(fā)酵菌種配比,接種量,發(fā)酵溫度,發(fā)酵時間 4 個因素分別進(jìn)行單因素試驗,根據(jù)單因素試驗結(jié)果,選擇菌種配比,發(fā)酵溫度,接種量設(shè)計三因素三水平的正交試驗,最終確定發(fā)酵最佳工藝。

1.2.2.1 發(fā)酵時間的選擇

在待發(fā)酵南瓜汁中,按菌種配比(SY∶乳酸菌群 =1∶2,體積比)接入 3 %的種子培養(yǎng)液,37 ℃靜置發(fā)酵24 h,每 2 h 測定發(fā)酵過程 pH 的變化。

1.2.2.2 菌種配比的選擇

發(fā)酵溫度 37 ℃,接種量為 3 %,發(fā)酵時間為 12 h的條件下,采用不同菌種配比(SY∶ 乳酸菌群 =1∶1、1 ∶2、1 ∶ 3、1 ∶ 4、1 ∶ 5,體積比)對南瓜汁進(jìn)行發(fā)酵,根據(jù)pH、活菌數(shù)及感官得分確定最佳菌種配比。

1.2.2.3 接種量的選擇

發(fā)酵溫度 37 ℃,菌種配比(SY ∶ 乳酸菌群 =1 ∶ 2,體積比),發(fā)酵時間為 12 h 的條件下,采用不同接種量(1 %、2 %、3 %、4 %、5 %) 對南瓜汁進(jìn)行發(fā)酵, 根據(jù)pH、活菌數(shù)及感官得分確定最佳接種量。

1.2.2.4 發(fā)酵溫度的選擇

在接種量為 3 %,菌種配比(SY ∶ 乳酸菌群 =1 ∶ 2,體積比),發(fā)酵時間 12 h 的條件下,采用不同發(fā)酵溫度(30、33、36、39、42 ℃)對南瓜汁進(jìn)行發(fā)酵,根據(jù) pH、活菌數(shù)及感官得分確定最佳發(fā)酵溫度。

1.2.2.5 感官評價

采用評分檢驗法對發(fā)酵南瓜汁進(jìn)行感官評價。 分析評定的指標(biāo)有色澤、香氣、滋味和組織狀態(tài),各指標(biāo)評分標(biāo)準(zhǔn)見表 2。

綜合得分為 4 個指標(biāo)評分之和, 即綜合得分=色澤得分+香氣得分+滋味得分+組織狀態(tài)得分。

1.2.2.6 發(fā)酵工藝條件正交試驗

在單因素試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,為進(jìn)一步得到南瓜汁發(fā)酵的最佳工藝條件, 對影響南瓜汁發(fā)酵的 3 個主要因素:菌種配比(1 ∶ 2、1 ∶ 3、1 ∶ 4,體積比),接種量(2 %、3 %、4 %),發(fā)酵溫度(34、36、38℃)進(jìn)行優(yōu)化組合,選用三因素三水平正交試驗設(shè)計,測定發(fā)酵過程的 pH、活菌數(shù)及感官得分,確定最佳發(fā)酵工藝條件。試驗設(shè)計的各因素水平見表3。

2結(jié)果與討論

2.1 種子培養(yǎng)基的優(yōu)化

由表 4 的極差 R 值可以看出 RD>RB>RA>RC, 即在正交試驗所設(shè)計的各因素水平中,豆?jié){、南瓜漿、葡萄糖、碳酸鈣的添加量對于種子液活菌數(shù)的影響依次增大,碳酸鈣對活菌數(shù)的影響最大,葡萄糖次之,兩種物質(zhì)對于乳酸菌的生長作用明顯。從表 4 還可以看出,活菌數(shù)對數(shù)最高的是A3B2C1D3, 進(jìn)一步繪制各因素水平趨勢,如圖 1 所示。

直觀分析得出的最佳組合為 A3B2C1D3, 與正交試驗結(jié)果一致, 因此種子液培養(yǎng)基的最佳組合為A3B2C1D3,即南瓜漿含量 40 %,葡萄糖 2 %,豆?jié){ 5 %和碳酸鈣 0.4 %。

2.2 發(fā)酵工藝優(yōu)化

2.2.1 發(fā)酵時間對發(fā)酵過程的影響

酸性飲料的 pH 一般為 3.8~4.2。由圖 2 可知,發(fā)酵時間對發(fā)酵過程pH 變化影響顯著。 在發(fā)酵初始階段(0 h~2 h),pH 下降較慢,在發(fā)酵 2 h~8 h 時,各菌株生長旺盛,產(chǎn)酸較快,發(fā)酵 10 h 時,pH 為 4.09,已達(dá)到酸性飲料的要求,為了使發(fā)酵風(fēng)味更好,適當(dāng)延長發(fā)酵時間至 12 h,此時 pH 為 3.94,發(fā)酵液感官評分較高,所以確定發(fā)酵時間為 12 h。

2.2.2 菌株配比對發(fā)酵過程的影響

從表 5 可以看出,在發(fā)酵溫度為 37 ℃,接種量為3 %,發(fā)酵 12 h 的條件下,不同菌種配比對 pH、乳酸菌活菌數(shù)及感官得分都具有顯著性差異,菌種配比為 1 ∶3(體積比)時,pH 為 3.89,感官得分為 8.5,lg(CFU/mL)為 9.13,此時感官得分較高,乳酸菌含量豐富,因此確定菌種配比為 1 ∶ 3(體積比)。

2.2.3 接種量對發(fā)酵過程的影響

由表 6 可以看出, 不同接種量對于發(fā)酵過程具有顯著性差異。 隨著接種量的增加,產(chǎn)酸增加,pH 下降,感官評定分值升高,乳酸菌數(shù)量增加,當(dāng)接種量為 3 %,繼續(xù)增加接種量,pH 變化不顯著, 感官得分及活菌數(shù)量均有所下降。 因此,確定接種量為 3 %。

2.2.4 不同發(fā)酵溫度對發(fā)酵的影響

由表 7 可以看出, 發(fā)酵溫度對于產(chǎn)品風(fēng)味和乳酸菌的含量有顯著影響。當(dāng)溫度在30 ℃~39 ℃時,隨著溫度的升高,產(chǎn)酸增加,pH 下降,產(chǎn)品風(fēng)味較好,但是當(dāng)溫度大于 36 ℃時,活菌數(shù)有所下降。 因此,綜合考慮,確定發(fā)酵溫度為36℃。

2.2.5 發(fā)酵工藝優(yōu)化結(jié)果

從表 8 正交試驗結(jié)果的極差分析可以看出, 各試驗組 pH 符合酸性發(fā)酵飲料的標(biāo)準(zhǔn)。 就感官得分的影響因素而言,菌種配比、發(fā)酵溫度、接種量對感官指標(biāo)的影響依次減少。 就乳酸菌活菌數(shù)的影響因素而言,接種量、發(fā)酵溫度、菌種配比對活菌數(shù)的影響依次減少。 進(jìn)一步繪制各因素水平與感官得分、活菌數(shù)對數(shù)值的效應(yīng)曲線圖。

由效應(yīng)曲線圖 3 可知,對于感官得分的影響,各因素的最優(yōu)水平為A2B2C2,從效應(yīng)曲線圖 4 可知,對活菌數(shù)的影響, 各因素的最優(yōu)水平為A2B2C2,最優(yōu)組合一致。與試驗中出現(xiàn)的兩個最優(yōu)組合A2B1C2和A2B2C3相比較,是由于因素 B 和 C 有差異。 為了進(jìn)一步確定結(jié)果,通過試驗測定 A2B2C2組的各項指標(biāo),得到 pH3.83,感官得分 8.9,lg(CFU/mL)為 9.20,優(yōu)于試驗組 A2B1C2和 A2B2C3,因此,選擇A2B2C2 作為最佳發(fā)酵工藝條件,即發(fā)酵溫度 36 ℃, SY∶乳酸菌群=1∶3, 接種量 3 %,發(fā)酵時間為 12 h。

3結(jié)論

本文以南瓜汁為原料,通過多種乳酸菌和酵母菌共同發(fā)酵, 開發(fā)了一款風(fēng)味獨特的南瓜汁發(fā)酵飲料。 對發(fā)酵劑的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究。確定乳酸菌種子培養(yǎng)基為以南瓜漿為基礎(chǔ), 添加豆?jié){、葡萄糖以補充氮源及碳源、添加碳酸鈣調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 pH。 通過正交試驗設(shè)計優(yōu)化了種子培養(yǎng)基配方為:南瓜漿含量 40 %,葡萄糖 2 %,豆?jié){ 5 %和碳酸鈣0.4%。在此條件下,乳酸菌對數(shù)值可以達(dá)到 9.37。對發(fā)酵過程中對釀酒酵母和乳酸菌群的菌種配比、 接種量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間進(jìn)行優(yōu)化,確定了最佳發(fā)酵工藝:發(fā)酵溫度 36 ℃,釀酒酵母 SY∶乳酸菌群(體積比)=1∶3,接種量 3 %,發(fā)酵時間為 12 h。

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