2 發(fā)酵飼料

2.1 試驗(yàn)菌種

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）UR-3是由河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司通過紫外誘變得來，現(xiàn)保存于中國微生物菌種保藏中心。

2.2 乳酸菌發(fā)酵液體飼料生產(chǎn)工藝

試驗(yàn)過程中，河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司提供本研究所用的FLF，主要使用30kg桶裝式進(jìn)行液體發(fā)酵，主要提供于養(yǎng)殖場(chǎng)和應(yīng)用試驗(yàn)的研究。發(fā)酵過程中所用的桶自帶排氣閥，密封性好,可保質(zhì)一個(gè)月。乳酸菌FLF是將基礎(chǔ)日糧中的玉米：豆粕和麩皮水都按1：2的比例放入發(fā)酵桶中進(jìn)行發(fā)酵，每桶總質(zhì)量30kg，接入U(xiǎn)R-3種子液1800ml，常溫發(fā)酵48~72h，飼喂前每桶按基礎(chǔ)日糧配方干物質(zhì)的量添加4%的仔豬預(yù)混料，最后制成Ⅲ組的飼喂日糧。發(fā)酵前后，乳酸菌發(fā)酵液體飼料營(yíng)養(yǎng)成分變化顯著，粗蛋白、生物量和乳酸含量都顯著高于尚未發(fā)酵的發(fā)酵液體飼料，具體營(yíng)養(yǎng)成分價(jià)值分析參照參考文獻(xiàn)，此乳酸菌FLF的pH值≤4.0，且有濃郁的酸香味時(shí)即可飼喂。

3 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

分別在試驗(yàn)階段的第0d和第30d的清晨，將試驗(yàn)仔豬逐頭空腹稱重，以每重復(fù)組為單位，記錄體重，計(jì)算飼喂期間仔豬的平均日增重（ADG）。

每天記錄每個(gè)豬圈的投料量和飼喂結(jié)束的剩余量得到總的采食量，計(jì)算試驗(yàn)期間仔豬的平均日采食量（ADFI）和料重比(F/G)。

4 糞樣菌群

4.1 樣品采集

在試驗(yàn)進(jìn)行的第20d和第30d清晨，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選2頭健康仔豬，采集其新鮮無污染微生物糞便，放冰箱-20℃待測(cè)。

4.2 糞樣的稀釋

在無菌條件下，稱取1g糞樣放入加有9ml磷酸鹽緩沖液的試管內(nèi)，放玻璃珠進(jìn)行震蕩使糞便均質(zhì)化，振蕩器中振蕩5min后制成10-1稀釋液，隨后將此稀釋液加入放有9ml無菌磷酸鹽緩沖液的試管中制成10-2稀釋液，再次在振蕩器中振蕩5min，依此分別進(jìn)行10-3~10-6倍的稀釋液的制備。

4.3 培養(yǎng)及菌落計(jì)數(shù)

大腸桿菌：在EMB固體培養(yǎng)基上接入糞樣稀釋液，37℃、24h培養(yǎng)后分別進(jìn)行生理生化鑒定和平板計(jì)數(shù)。沙門氏菌：在SS固體培養(yǎng)基上接入糞樣稀釋液，37℃、24h有氧培養(yǎng)后進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。乳酸菌：在MRS固體培養(yǎng)基上接入糞樣稀釋液，37 ℃、48h厭氧培養(yǎng)后進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

5 發(fā)病率

對(duì)仔豬的每日采食量、糞便質(zhì)量、發(fā)病數(shù)量、死亡量、腹瀉情況、精神狀況和仔豬肛門污染狀況等進(jìn)行密切觀察和記錄，包括仔豬出現(xiàn)感冒、發(fā)熱、關(guān)節(jié)腫痛、咳嗽、皮膚出現(xiàn)異常等常見病也要記錄在案。發(fā)病率(%)=總發(fā)病頭次數(shù)總頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)×100

6 血液生化指標(biāo)

6.1 血清的制備

試驗(yàn)完成的倒數(shù)第二天，將試驗(yàn)仔豬禁飼12h，這期間自由飲水。隨機(jī)選1頭健康接近平均體重的仔豬，頸靜脈采血，常溫靜置15min后進(jìn)行血清的分離，用離心機(jī)4000r/min離心5min，保存于-20℃冰箱。

6.2血液生化指標(biāo)測(cè)定

先解凍血清，再采用血液生化分析儀測(cè)定血清中的總膽固醇、三酰甘油、總蛋白、葡萄糖的等指標(biāo)含量；用免疫透射比濁法測(cè)定血清中免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的指標(biāo)含量。

7 數(shù)據(jù)處理

用DPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)方差分析。

結(jié)果

1 乳酸菌FLF對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響（見表2）

由表2可知，各組仔豬初始體重差異不顯著；但在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對(duì)照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組的末重明顯增加，分別提高了7.95%(P<0.05)和8.17%(P

2 乳酸菌FLF對(duì)仔豬糞樣菌群的影響（見表3）

從表3可知，與對(duì)照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組糞樣中大腸桿菌的數(shù)量分別降低了45.10%(P<0.05)和46.46%(P<0.05)；沙門氏菌的數(shù)量分別降低了78.57%(P<0.05)和84.87%(P<0.05)；Ⅲ組的乳酸菌的數(shù)量顯著提高(P<0.05)。

3 乳酸菌FLF對(duì)仔豬發(fā)病率的影響（見表4）

如表4所示，試驗(yàn)過程中無試驗(yàn)豬死亡。與對(duì)照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組的發(fā)病率分別顯著降低了68.36%(P<0.05)和71.35(P<0.05)，Ⅱ組與Ⅲ組之間的差異顯著(P<0.05)。

4 乳酸菌FLF對(duì)仔豬血液生化指標(biāo)的影響(見表5)

由表5的血液生化指標(biāo)可以得出，三組試驗(yàn)血樣中總膽固醇、三酰甘油和免疫球蛋白M含量差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組血樣中總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G指標(biāo)明顯提高，差異顯著(P<0.05)，且Ⅱ組與Ⅲ組間差異顯著( P<0.05)。與對(duì)照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組血樣中尿素氮含量明顯降低，差異顯著(P<0.05)，而且Ⅱ組與Ⅲ組間差異顯著(P<0.05)；Ⅱ組和Ⅲ組血樣中葡萄糖含量明顯提高，差異顯著(P<0.05)，且Ⅱ組與Ⅲ組間差異顯著(P<0.05)。

討論

從試驗(yàn)測(cè)定的仔豬生長(zhǎng)性能一系列指標(biāo)如：平均日增重、平均日采食量、料重比以及發(fā)病率等來看，試驗(yàn)Ⅲ組乳酸菌FLF的試驗(yàn)效果最好，不但提高了仔豬平均日增重和平均日采食量，而且明顯降低了料肉比和發(fā)病率。把固體飼料制成液體飼料，可以分解、軟化固體飼料，減少了仔豬胃腸道刺激，這樣可以使仔豬對(duì)飼料原料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收速度加快，進(jìn)一步提高了仔豬的采食量。

由于仔豬的食物由母乳轉(zhuǎn)為固態(tài)所造成的一系列應(yīng)激反應(yīng)，當(dāng)飼喂仔豬液體飼糧后，可以有效降低并防止仔豬機(jī)能的紊亂，并保護(hù)了仔豬的胃腸道，降低腹瀉率，還能降低固體飼料粉末刺激仔豬呼吸道的幾率，從而降低動(dòng)物的呼吸道發(fā)病率，進(jìn)而提高成活率。但液體飼料也存在一些弊端，如液體飼料增加了環(huán)境濕度，豬場(chǎng)的衛(wèi)生環(huán)境難度加大；另外料槽內(nèi)余下的液態(tài)飼料易霉變，極易發(fā)生仔豬中毒或感染腹瀉，所以勤清掃飼槽是十分有必要的。

FLF作為新型的綠色飼料，比固體飼料或一般的液體飼料更具明顯的優(yōu)勢(shì)，雖然益生菌FLF還存在著質(zhì)量不穩(wěn)定，使用范圍小，使用效果不均一等方面的問題，而且當(dāng)前FLF尚處在初期探索研究階段，也僅僅局限于斷奶仔豬應(yīng)用階段，但我們有理由相信，隨著FLF加工設(shè)備的不斷發(fā)展，生產(chǎn)技術(shù)的不斷完善，只要解決了加工控制、菌種選擇和飼喂系統(tǒng)等問題，F(xiàn)LF必將是理想的抗生素促生長(zhǎng)因子替代品。FLF的普及應(yīng)用會(huì)進(jìn)一步快速提高畜牧業(yè)的生產(chǎn)水平，為綠色畜產(chǎn)品的生產(chǎn)提供有力的支持。

綜上，本試驗(yàn)結(jié)果可能與FLF產(chǎn)生作用效果的機(jī)理有關(guān)：經(jīng)乳酸菌發(fā)酵的飼料，營(yíng)養(yǎng)更豐富，含有豐富的乳酸菌及其代謝產(chǎn)物、乳菌素、小肽和維生素等，呈酸性，具有酸香氣味，適口性好，動(dòng)物喜食，提高了動(dòng)物的日采食量和日增重，從而提高仔豬的生長(zhǎng)性能；飼喂畜禽后可抑制腸道有害菌的生長(zhǎng)，乳酸菌數(shù)量大量增加，可以在動(dòng)物腸道內(nèi)大量定植，有效調(diào)整腸道菌群平衡，可分泌乳酸，并產(chǎn)生多種消化酶，幫助食物消化和代謝，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)質(zhì)的吸收和利用，進(jìn)一步增強(qiáng)了動(dòng)物機(jī)體的免疫力，而且改善了仔豬的腸道健康并預(yù)防動(dòng)物的腹瀉。

結(jié)論

本試驗(yàn)表明，與對(duì)照相比飼喂乳酸菌FLF的仔豬的末重提高了8.17%，平均日增重提高了16.12%，平均日采食量提高了8.91%，料肉比降低了6.20%，同時(shí)也可以降低仔豬發(fā)病率,提高仔豬血液中總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G、葡萄糖的含量，降低血液中尿素氮的含量?？梢?，F(xiàn)LF不僅可以使仔豬的應(yīng)激反應(yīng)減少、采食量增加，而且可以提高仔豬的生長(zhǎng)速度和成活率，進(jìn)而降低養(yǎng)殖成本。因此，F(xiàn)LF作為一種高效、綠色、生態(tài)和安全的飼料具有在各類養(yǎng)豬場(chǎng)推廣應(yīng)用的潛力。

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