酵母培養(yǎng)物對山羊亞急性瘤胃酸中毒體外發(fā)酵模型的調(diào)控作用

2020-10-14 17:10:20 點擊：

摘　要：本試驗旨在探究酵母培養(yǎng)物（ＹＣ）對山羊亞急性瘤胃酸中毒外發(fā)酵模型的調(diào)控作用。采用體外批次培養(yǎng)法，在不同非纖維性碳水化合物（ＮＦＣ）／中性洗滌纖維（ＮＤＦ）［１.１９（常規(guī)底物）和２.３０（高ＮＦＣ底物）］的底物中分別添加６個水平［０（對照）、０.５％、１.０％、１.５％、２.０％和２.５％］的ＹＣ，探究其對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響，并用多項指標(biāo)綜合指數(shù)（ＭＦＡＥＩ）進行評定，篩選出在不同ＮＦＣ／ＮＤＦ條件下最適ＹＣ添加水平。結(jié)果表明：１）在高ＮＦＣ底物條件下，發(fā)酵液ｐＨ低于５.８時長超過３ｈ，體外亞急性瘤胃酸中毒模型建立成功；且添加ＹＣ能夠穩(wěn)定９～１２ｈ的ｐＨ，顯著降低１２和２４ｈ乳酸含量（Ｐ＜０.０５），顯著降低９和１２ｈ氨態(tài)氮（NH3-N）含量（Ｐ＜０.０５），顯著提高１２ｈ微生物蛋白（ＭＣＰ）含量（Ｐ＜０.０５），顯著提高３、６、１２、２４ｈ乙酸百分比（Ｐ＜０.０５），顯著提高２４ｈ總揮發(fā)性脂肪酸（ＴＶＦＡ）含量（Ｐ＜０.０５）。２）在常規(guī)底物條件下，ＹＣ能穩(wěn)定瘤胃發(fā)酵液２４ｈ的ｐＨ，顯著降低１２ｈ乳酸含量（Ｐ＜０.０５），顯著提高９ｈ的NH3-N含量、６和１２ｈＭＣＰ含量及３～２４ｈＴＶＦＡ含量（Ｐ＜０.０５）。３）ＭＦＡＥＩ結(jié)果表明，常規(guī)底物條件下，以１.５％的ＹＣ添加水平對體外發(fā)酵作用效果最佳；高ＮＦＣ底物條件下，以２.０％的ＹＣ添加水平對亞急性瘤胃酸中毒的緩解作用最佳。因此，在高ＮＦＣ底物條件下添加ＹＣ的作用效果更好，能通過降低發(fā)酵液中乳酸含量達到調(diào)控瘤胃發(fā)酵液ｐＨ的效果，具有緩解亞急性瘤胃酸中毒的潛力。

我國優(yōu)質(zhì)粗飼料資源缺乏，為滿足生產(chǎn)需要許多養(yǎng)殖者通過在反芻動物飼糧中添加高精料以滿足動物的營養(yǎng)需要，但高精料的過度攝入會導(dǎo)致動物發(fā)生亞急性瘤胃酸中毒（ｓｕｂａｃｕｔｅｒｕｍｅｎａｃｉｄｏｓｉｓ，ＳＡＲＡ）。ＳＡＲＡ的產(chǎn)生不僅給我國反芻動物養(yǎng)殖業(yè)帶來了很巨大的損失，而且也是阻礙我國反芻動物發(fā)展的主要阻力之一。近年來，許多學(xué)者都致力于尋找一種能高效、無副作用緩解瘤胃酸中毒的方法，現(xiàn)有的緩解瘤胃酸中毒癥狀的方法有：添加緩沖劑、接種乳酸利用菌、添加有機酸、添加硫胺素、接種疫苗。這些方法雖在一定程度上能夠緩解瘤胃酸中毒所帶來的經(jīng)濟損失，但是也均存在一定的弊端，不能從根本上解決瘤胃酸中毒這個問題。酵母培養(yǎng)物（ｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅ，ＹＣ）作為一種微生物發(fā)酵產(chǎn)物添加劑，有望通過調(diào)節(jié)瘤胃微生物區(qū)系的穩(wěn)定來達到調(diào)控瘤胃酸中毒的效果。

ＹＣ是由酵母菌在特定培養(yǎng)基上經(jīng)過特定的制作工藝發(fā)酵而成的一種微生物添加劑，其中富含維生素Ｂ、微量元素、未知營養(yǎng)因子、霉菌吸附劑寡糖、消化酶、氨基酸、有機酸和碳水化合物。近年來，ＹＣ作為一種微生物添加劑已經(jīng)在反芻動物生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，能夠改善瘤胃發(fā)酵模式和提高動物生產(chǎn)性能。有研究表明，ＹＣ可以通過減少乳酸的產(chǎn)生、增加瘤胃微生物對乳酸的利用量而穩(wěn)定瘤胃ｐＨ。但也有研究表明，ＹＣ對瘤胃ｐＨ沒有顯著影響，但能夠降低瘤胃內(nèi)的乳酸含量。ＹＣ對反芻動物作用的效果受菌株種類、飼糧類型、活菌含量等多種因素影響，體內(nèi)、外試驗結(jié)果也不盡相同。因此，本試驗以薩能山羊為試驗動物，通過體外批次培養(yǎng)法，探討在不同非纖維性碳水化合物（ＮＦＣ）／中性洗滌纖維（ＮＤＦ）底物條件下添加不同水平的ＹＣ對由高ＮＦＣ飼糧誘發(fā)的ＳＡＲＡ的調(diào)控作用，為ＹＣ在山羊生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1材料與方法

１.１　試驗動物及飼糧

選?。持惑w重相近、安裝有永久性瘤胃瘺管的健康薩能山羊作為體外發(fā)酵瘤胃液的供體，飼糧組成及營養(yǎng)水平如表１所示。試驗所用ＹＣ是由湖北某酵母股份有限公司提供，經(jīng)釀酒酵母菌屬發(fā)酵而成的，其成分為：酵母活細胞數(shù)≥２億個／ｇ，粗蛋白質(zhì)含量≥２０％，甘露寡糖含量≥１０％，水分含量≤８％。試驗動物每日飼喂２次（０７：００和１９：００），單欄飼養(yǎng)，自由飲水，試驗在揚州大學(xué)動物科技學(xué)院動物房進行。

１.２　試驗設(shè)計

試驗為單因素試驗設(shè)計，在不同ＮＦＣ／ＮＤＦ［１.１９（常規(guī)底物）和２.３０（高ＮＦＣ底物）］的底物中分別添加６個水平［０（對照）、０.５％、１.０％、１.５％、２.０％和２.５％］的ＹＣ，采用體外批次培養(yǎng)法探究其對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響。

１.３　瘤胃液的采集

試驗當(dāng)天于晨飼前進行瘤胃液的采集，采用自制真空負壓裝置采集山羊瘤胃前、中、后３個不同部位的瘤胃液，之后迅速混勻經(jīng)４層紗布過濾，裝入提前預(yù)熱且充滿二氧化碳（CO2）的保溫瓶中迅速帶回實驗室，于３８℃恒溫水浴鍋中保溫，并持續(xù)通以CO2。

１.４　體外發(fā)酵液與底物的配制

試驗選用半純合飼糧為發(fā)酵底物，底物組成如表２所示；試驗所用人工唾液，參照Ｌｅｅｄｌｅ等的方法配制而成，將配制好的人工唾液放入水浴鍋中水浴至３８℃并持續(xù)通入CO2備用。將６０ｍＬ瘤胃液和人工唾液的混合液（瘤胃液∶人工唾液＝１∶２）分裝至厭氧培養(yǎng)瓶中，分裝時向發(fā)酵瓶中通５ｓ以上CO2以排除空氣，分裝完畢迅速加蓋異丁基塑膠塞，并以黑色塑料旋擰蓋固定密封，置于３８℃恒溫水浴搖床中進行培養(yǎng)。每個時間點每組設(shè)置３個重復(fù)，分別于培養(yǎng)后的３、６、９、１２、２４ｈ采集發(fā)酵液，用于測定各發(fā)酵參數(shù)。

１.５　發(fā)酵參數(shù)測定方法

發(fā)酵液ｐＨ選用ｐＨＳ－３Ｃ型ｐＨ計進行測定；氨態(tài)氮（NH3-N）含量參考Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋ等的苯酚－次氯酸鈉比色法進行測定；揮發(fā)性脂肪酸（ＶＦＡｓ）含量參照Ｋａｗａｍｏｔｏ等和Ｋｈａｎ等的氣相色譜法，用日本津島公司生產(chǎn)的ＧＣ－９Ａ氣相色譜儀進行測定；微生物蛋白（ＭＣＰ）含量參照嘌呤法，用紫外分光光度計進行測定；乳酸含量使用南京建成生物工程研究所Ａ０１９－２乳酸試劑盒測定。

１.６　數(shù)據(jù)處理

用ＳＰＳＳ１９.０軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，并用Ｄｕｎｃａｎ氏法進行多重比較，并應(yīng)用多項指標(biāo)綜合指數(shù)（ＭＦＡＥＩ）進行評定，Ｐ≤０.０５表示差異顯著。

式中：Ａ１是對照組各個時間點各指標(biāo)數(shù)值；Ａ２分別為０.５％、１.０％、１.５％、２.０％及２.５％組各個時間點各指標(biāo)數(shù)值；Ａ３是在每個時間點Ａ２總和的平均值。ＭＦＡＥＩ為各ＳＦＡＥＩ的加和值。

2結(jié)果

2.1 不同ＮＦＣ／ＮＤＦ底物中添加不同水平ＹＣ對瘤胃發(fā)酵液ｐＨ的影響

由表３可知，在不同底物發(fā)酵條件下發(fā)酵液ｐＨ隨著發(fā)酵時間的延長而降低。常規(guī)底物條件下，發(fā)酵３～１２ｈ時，各試驗組發(fā)酵液ｐＨ均高于對照組，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵２４ｈ時，０.５％組、１.０％組和１.５％組發(fā)酵液ｐＨ均顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.０％組與２.５％組發(fā)酵液ｐＨ與對照組相比差異不顯著（Ｐ＞０.０５）。

高ＮＦＣ底物條件下，發(fā)酵３和６ｈ時，各試驗組發(fā)酵液ｐＨ均高于對照組，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵９ｈ時，２.０％組與２.５％組發(fā)酵液ｐＨ顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），其余各組發(fā)酵液ｐＨ雖有所升高，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵１２ｈ時，２.０％組與２.５％組發(fā)酵液ｐＨ顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），１.０％組與１.５％組發(fā)酵液ｐＨ顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組發(fā)酵液ｐＨ與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。發(fā)酵２４ｈ時，０.５％組、１.０％組和１.５％組瘤胃發(fā)酵液ｐＨ顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.０％組和２.５％組與對照組無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

２.２　不同ＮＦＣ／ＮＤＦ底物中添加不同水平ＹＣ對瘤胃發(fā)酵液NH3-N含量的影響

由表３可知，在不同底物條件下隨著發(fā)酵時間的延長，發(fā)酵液NH3-N含量均呈現(xiàn)升高的趨勢。常規(guī)底物條件下，各組NH3-N含量在發(fā)酵１２ｈ時達到最高，在２４ｈ時有所降低。發(fā)酵３、６和１２ｈ時，各試驗組NH3-N含量均高于對照組，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵９ｈ時，１.０％組和１.５％組NH3-N含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），其他各試驗組NH3-N含量雖高于對照組，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵２４ｈ時，１.５％組NH3-N含量顯著低于其他各組（Ｐ＜０.０５），其他各組間無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

高ＮＦＣ底物條件下，發(fā)酵３ｈ時，添加ＹＣ各組NH3-N含量均高于對照組，其中１.５％組、２.０％組和２.５％組與對照組相比差異顯著（Ｐ＜０.０５），0.５％組和１.０％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵６ｈ時，１.０％組的NH3-N含量最低，且顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），其余試驗組與對照組相比均無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵９ｈ時，添加ＹＣ各組NH3-N含量均低于對照組，且差異顯著（Ｐ＜０.０５），１.５％組NH3-N含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）；發(fā)酵１２ｈ時，１.５％組NH3-N含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），其余各試驗組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵２４ｈ時，０.５％組和１.５％組NH3-N含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），其他各組間無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

２.３　不同ＮＦＣ／ＮＤＦ底物中添加不同水平ＹＣ對瘤胃發(fā)酵液ＭＣＰ含量的影響

由表３可知，在不同底物條件下ＭＣＰ含量隨著發(fā)酵時間的延長呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢。常規(guī)底物條件下，發(fā)酵３、９和２４ｈ時，各試驗組ＭＣＰ含量均高于對照組，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵６ｈ時，１.５％組ＭＣＰ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），其他各試驗組ＭＣＰ含量與對照組相比差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵１２ｈ時，添加ＹＣ各組ＭＣＰ含量均高于對照組，其中１.５％組和２.０％組差異顯著（Ｐ＜０.０５），其他各試驗組與對照組之間無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

高ＮＦＣ底物條件下，發(fā)酵３ｈ時，０.５％組、１.０％組和１.５％組ＭＣＰ含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），２.０％組和２.５％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵６ｈ時，１.５％組和２.０％組ＭＣＰ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），其余各試驗組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵９ｈ時，１.５％組ＭＣＰ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），１.０％組和２.５％組ＭＣＰ含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組與２.０％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵１２ｈ時，添加ＹＣ的各組ＭＣＰ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），其中以１.５％組最高；發(fā)酵２４ｈ時，各組間ＭＣＰ含量無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

２.４　不同ＮＦＣ／ＮＤＦ底物中添加不同水平ＹＣ對瘤胃發(fā)酵液乳酸含量的影響

由表３可知，在不同底物條件下各組乳酸含量均隨著發(fā)酵時間的延長而逐漸升高。常規(guī)底物條件下，發(fā)酵３～９ｈ時，各試驗組乳酸含量均低于對照組，但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵１２ｈ時，添加ＹＣ各組乳酸含量均顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）；發(fā)酵２４ｈ時，１.５％組和２.５％組乳酸含量與對照組相比差異不顯著（Ｐ＞０.０５），１.０％組和２.０％組乳酸含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組乳酸含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）。

高ＮＦＣ底物條件下，發(fā)酵３～９ｈ時，各試驗組乳酸含量與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵１２和２４ｈ時，添加ＹＣ各組乳酸含量均顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），其中發(fā)酵１２ｈ時以０.５％組乳酸含量最低，發(fā)酵２４ｈ時，以０.５％組和１.５％組乳酸含量最低。

２.５　不同ＮＦＣ／ＮＤＦ底物中添加不同水平ＹＣ對瘤胃發(fā)酵液ＶＦＡｓ含量的影響

由表４可知，發(fā)酵液總揮發(fā)性脂肪酸（ＴＶＦＡ）含量隨著發(fā)酵時間的延長持續(xù)升高且發(fā)酵各階段ＴＶＦＡ含量均高于對照組。常規(guī)底物條件下，發(fā)酵３ｈ時，１.５％組和２.５％組丙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.５％組丁酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組、１.０％組、２.０％組ＴＶＦＡ含量均顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），１.５％組和２.５％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）；發(fā)酵６ｈ時，０.５％組和１.５％組丁酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.０％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），其他各試驗組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。發(fā)酵９ｈ時，２.０％組丙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.５％組顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組、１.５％組、２.０％組和２.５％組丁酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組和１.５％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），但１.０％組、２.０％組和２.５％組雖有升高的趨勢但差異不顯著（Ｐ＞０.０５）。發(fā)酵１２ｈ時，２.０％組和２.５％組丙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），０.５％組、１.０％組、１.５％組和２.０％組丁酸百分比顯著高與對照組（Ｐ＞０.０５），１.０％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.５％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５），０.５％組、１.５％組和２.０％組ＴＶＦＡ含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）。發(fā)酵２４ｈ時，１.５％組和２.０％組丙酸百分比顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）；２.０％組的丁酸百分比顯著高于其他各組（Ｐ＜０.０５）；２.０％組和２.５％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）。發(fā)酵３～２４ｈ，各組間乙酸百分比均無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

高ＮＦＣ底物條件下，發(fā)酵３ｈ時，２.０％組和２.５％組乙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）；０.５％組、１.５％組、２.０％組和２.５％組丙酸百分比顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）；２.０％組和２.５％組丁酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）；１.５％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），２.０％組和２.５％組ＴＶＦＡ含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）。發(fā)酵６ｈ時，２.０％組和２.５％組乙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）。發(fā)酵９ｈ時，２.０％組和２.５％組丁酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）；１.０％組和１.５％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）。發(fā)酵１２ｈ時，２.０％組和２.５％組乙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）；２.５％組丙酸百分比顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５）；２.０％組丁酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）；０.５％組、１.５％組和２.０％組ＴＶＦＡ含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），２.５％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５），１.０％組ＴＶＦＡ含量顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）。發(fā)酵２４ｈ時，各組間乙酸百分比無顯著差異（Ｐ＞０.０５），２.０％組丙酸百分比顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５）；０.５％組和１.０％組ＴＶＦＡ含量顯著低于對照組（Ｐ＜０.０５），２.０％組和２.５％組顯著高于對照組（Ｐ＜０.０５），１.５％組與對照組相比無顯著差異（Ｐ＞０.０５）。

２.６　不同ＹＣ添加水平對瘤胃發(fā)酵液參數(shù)的綜合評定

由表５知，不同底物條件下添加ＹＣ對個單項發(fā)酵指標(biāo)的影響不同。常規(guī)底物條件下，ｐＨ以２.０％組和２.５％組較高；NH3-N含量以１.０％組和２.０％組較高；ＭＣＰ含量以１.５％組和２.５％組較高；ＴＶＦＡ含量以１.５％組和２.５％組較高。高ＮＦＣ底物條件下，ｐＨ以２.０％組和２.５％組較高；NH3-N含量以２.０％組和２.５％組較高；ＭＣＰ含量以１.５％組和２.０％組較高；ＴＶＦＡ含量以２.０％組和２.５％組較高。從體外發(fā)酵單項指標(biāo)無法確定ＹＣ適宜的添加水平，因此，需對各項指標(biāo)進行綜合評定。在進行不同ＹＣ添加水平瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的組合效應(yīng)綜合評定時，選定不添加ＹＣ組作為參照，依據(jù)ＭＦＡＥＩ對ｐＨ及NH3-N、ＭＣＰ和ＴＶＦＡ含量進行綜合評定。常規(guī)底物條件下，ＭＦＡＥＩ自高到底的排序為１.５％組＞２.５％組＞２.０％組＞１.０％組＞０.５％組，因此，常規(guī)底物條件下，以１.５％的ＹＣ添加水平對體外發(fā)酵作用效果最佳。高ＮＦＣ底物條件下，ＭＦＡＥＩ自高到底的排序為２.０％組＞２.５％組＞０.５％組＞１.０％組＞１.５％組，因此，高ＮＦＣ底物條件下以２.０％的ＹＣ添加水平對體外發(fā)酵作用效果最佳。

3討論

反芻動物短時間采食過量易發(fā)酵碳水化合物，其在瘤胃微生物作用下轉(zhuǎn)化為大量有機酸（ＶＦＡ和乳酸），導(dǎo)致瘤胃ｐＨ下降，進而引起ＳＡＲＡ。有研究將瘤胃液ｐＨ５.８作為ＳＡＲＡ的診斷依據(jù)。瘤胃液ｐＨ的變化主要是受瘤胃液中ＴＶＦＡ和乳酸含量的影響，由于乳酸電離度遠高于一般的ＶＦＡ，因此乳酸對瘤胃ｐＨ的影響更大。本試驗結(jié)果表明，常規(guī)底物發(fā)酵過程中，發(fā)酵前１２ｈ發(fā)酵液ｐＨ均高于５.８，發(fā)酵２４ｈ時，對照組發(fā)酵液ｐＨ低于５.８，且添加ＹＣ能夠顯著提高瘤胃發(fā)酵液２４ｈ的ｐＨ，這與Ｌｉｌａ等的研究結(jié)果不一致，可能是由于所選用ＹＣ的種類不同，且體外條件下發(fā)酵過程中所積累的ＶＦＡ和乳酸不能及時的被瘤胃壁代謝吸收而導(dǎo)致２４ｈ的發(fā)酵液ｐＨ的降低。高ＮＦＣ底物發(fā)酵過程中，對照組發(fā)酵９～２４ｈ時，發(fā)酵液ｐＨ低于５.８超過３ｈ，這說明體外ＳＡＲＡ模型建立成功。添加ＹＣ能夠顯著提高９～２４ｈ瘤胃發(fā)酵液ｐＨ，減少發(fā)酵液ｐＨ低于５.８的時間可以維持瘤胃ｐＨ的穩(wěn)定，這與劉相玉等試驗結(jié)果一致。底物中添加ＹＣ能顯著提高ＴＶＦＡ含量，但同一時間點添加不同水平的ＹＣ對ＴＶＦＡ含量的影響并不一致，這可能是由于所添加活菌數(shù)不同而導(dǎo)致的，Ｄａｗｓｏｎ等研究表明，活菌含量的多少會影響ＹＣ的作用效果。乳酸作為瘤胃代謝的重要中間產(chǎn)物，其對瘤胃液ｐＨ的影響很大，有研究表明，瘤胃中乳酸的不斷積累會導(dǎo)致乳酸產(chǎn)生菌和乳酸利用菌失衡，進而導(dǎo)致ＳＡＲＡ的發(fā)生。乳酸含量的高低在一定程度上反映ＹＣ對ＳＡＲＡ的調(diào)控作用效果是否顯著，本試驗結(jié)果表明，在高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠顯著降低９～２４ｈ時發(fā)酵液中乳酸含量，這與劉相玉等研究結(jié)果一致，這可能是由于ＹＣ中營養(yǎng)物質(zhì)能夠促進瘤胃中乳酸利用菌的利用，進而降低發(fā)酵液中乳酸含量。在高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠顯著提高ＴＶＦＡ含量，降低乳酸含量，穩(wěn)定瘤胃液ｐＨ，具有緩解ＳＡＲＡ的效果。

反芻動物主要以ＶＦＡ的形勢利用碳水化合物，其中乙酸、丙酸和丁酸占瘤胃內(nèi)ＴＶＦＡ總量的９５％左右。乙酸是乳脂合成的主要前體，丙酸則是通過糖異生作用合成機體所需的葡萄糖，因此丙酸發(fā)酵型可為機體提供更多的能量，有利于提高動物的生產(chǎn)性能和飼料利用率。本試驗中，常規(guī)底物條件下，添加ＹＣ對乙酸及丙酸比例無顯著影響，但顯著提高了丁酸比例和ＴＶＦＡ含量；而高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠降低乙酸比例，提高丙酸和丁酸比例，提高ＴＶＦＡ含量。這可能是因為在不同ＮＦＣ／ＮＤＦ底物中，ＹＣ對其的作用效果不同，這與丁耿芝研究結(jié)果一致，隨著飼糧粗精比的升高，丙酸比例提高而乙酸比例降低。這也說明在高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠促進瘤胃發(fā)酵類型向丙酸發(fā)酵型發(fā)展。

NH3-N含量在一定程度上反映了瘤胃微生物對底物含氮物質(zhì)的利用程度，ＭＣＰ主要是反映瘤胃微生物對發(fā)酵液中氮源的利用情況，其為動物機體提供蛋白質(zhì)需要量的７０％～８０％。在體外試驗中ＹＣ對NH3-N含量的影響作用存在爭議，但有研究表明，添加ＹＣ能提高瘤胃液中ＭＣＰ含量。高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能顯著提高發(fā)酵３ｈ瘤胃液的NH3-N含量，顯著降低發(fā)酵６～２４ｈ瘤胃液的NH3-N含量，這可能是由于本試驗所選底物為半純合底物，其在體外發(fā)酵剛開始時被瘤胃微生物快速利用而導(dǎo)致瘤胃發(fā)酵液在發(fā)酵３ｈ時NH3-N含量升高，在發(fā)酵進行的６～２４ｈ中ＹＣ能夠促進瘤胃微生物對NH3-N的利用，進而導(dǎo)致發(fā)酵液中NH3-N含量降低，這與劉相玉等的研究結(jié)果一致。有研究表明，高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠促進NH3-N的吸收和轉(zhuǎn)化，進而降低瘤胃發(fā)酵液中NH3-N含量，提高ＭＣＰ的含量。本試驗中，高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠顯著降低發(fā)酵３ｈ瘤胃液中ＭＣＰ含量，顯著提高發(fā)酵６～１２ｈ瘤胃液的ＭＣＰ含量，這與NH3-N含量的變化趨勢一致，這說明在高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠促進瘤胃微生物的生長。

因此，在高ＮＦＣ底物條件下模擬ＳＡＲＡ，添加ＹＣ能夠通過降低發(fā)酵液中乳酸含量達到調(diào)控瘤胃發(fā)酵液ｐＨ的效果，促進瘤胃微生物對氨氮的利用于瘤胃微生物的生長，具有緩解ＳＡＲＡ的潛力。但大量研究表明，ＹＣ在體內(nèi)外對瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的影響作用具有一定差異，且ＹＣ的作用效果受多種因素（酵母菌種類、活性、添加劑量、飼糧種類）的影響。因此，未來需通過體內(nèi)試驗進一步來驗證ＹＣ對ＳＡＲＡ的緩解作用，還需應(yīng)用現(xiàn)代科技手段篩選出更高效持久的緩解ＳＡＲＡ的酵母產(chǎn)品。

4結(jié)論

①當(dāng)ＮＦＣ／ＮＤＦ為２.３０時，可成功建立體外ＳＡＲＡ模型。

②在高ＮＦＣ底物條件下，添加ＹＣ能夠穩(wěn)定瘤胃液ｐＨ，提高ＴＶＦＡ含量，降低乳酸含量，具有緩解ＳＡＲＡ的潛力，其中以添加底物干重的２.０％的ＹＣ對ＳＡＲＡ的緩解作用最佳。

③添加ＹＣ對常規(guī)底物的作用效果不明顯，以添加底物干重的１.５％的ＹＣ的改善作用效果最佳。

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酵母培養(yǎng)物對山羊亞急性瘤胃酸中毒體外發(fā)酵模型的調(diào)控作用

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