從表1看出沙棘皮渣、籽渣成分含量有一定差異，但總體差異并不顯著，一般的生產(chǎn)廠家皮渣、籽渣同時(shí)產(chǎn)生，故本實(shí)驗(yàn)采用上述2種的等量混合皮渣。

1.1.3 培養(yǎng)基

1.1.3.1 試管培養(yǎng)基

地衣芽孢桿菌，編號(hào)Y-03。LB培養(yǎng)基：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl10g、蒸餾水1000ml、瓊脂粉15g，pH值為7.0。

產(chǎn)朊假絲酵母，編號(hào)B-05。麥芽汁培養(yǎng)基。

白地霉，編號(hào)S-01。麥芽汁培養(yǎng)基。

1.1.3.2 液體發(fā)酵培養(yǎng)基

地衣芽孢桿菌LB培養(yǎng)基（g/l）：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化鈉10g，pH值為7.0。

產(chǎn)朊假絲酵母YPD培養(yǎng)基（g/l）：蛋白胨20g、酵母浸膏10g、葡萄糖20g，pH值為6.5。

白地霉YPD培養(yǎng)基（g/l）：蛋白胨20g、酵母浸膏10g、葡萄糖20g，pH值為6.5。

1.1.4 主要設(shè)備

SPH-2102恒溫培養(yǎng)搖床、PHS-3C型酸度計(jì)、SPX-450型恒溫培養(yǎng)箱、OLMPUS CX41顯微鏡、KDN-08A定氮儀。

1.2 方法

1.2.1 菌種培養(yǎng)方法

1.2.1.1 地衣芽孢桿菌

斜面菌種：35℃培養(yǎng)24h。

液體菌種：裝液量為100ml∕500ml，35℃，160r/min搖床培養(yǎng)36h。

1.2.1.2 產(chǎn)朊假絲酵母

斜面菌種：30℃培養(yǎng)48h。

液體菌種：裝液量為100ml∕500ml，30℃，160r/min搖床培養(yǎng)24h。

1.2.1.3 白地霉

斜面菌種：30℃培養(yǎng)48h。

液體菌種：裝液量為100ml∕500ml，30℃，200r/min搖床培養(yǎng)48h。

1.2.2 沙棘皮渣固體發(fā)酵培養(yǎng)方法

將培養(yǎng)好的液體菌種按一定接種量接入配好的固體物料中，加入營(yíng)養(yǎng)鹽，按一定水分含量拌勻，鋪于層架的屜層上，培養(yǎng)前期可上蓋滅菌的濕紗布，控制環(huán)境濕度80%左右，30℃恒溫恒濕固態(tài)培養(yǎng)，每天通風(fēng)換氣2~3次，每次20~30min。

1.2.3 蛋雞飼喂實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和日糧組成

實(shí)驗(yàn)選擇60周齡海蘭褐蛋雞2880只，隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，1到5組在基礎(chǔ)日糧中分別添加1%、2%、3%、4%、5%沙棘發(fā)酵飼料，對(duì)照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧；預(yù)試期7d，正式飼喂期35d，實(shí)驗(yàn)期共42d。基礎(chǔ)日糧參照中華人民共和國(guó)蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。

從表3結(jié)果可以看出，果渣配比超過(guò)70%時(shí)物料生長(zhǎng)明顯變差，說(shuō)明過(guò)高比例的沙棘果渣不利于菌體生長(zhǎng)，配比低于40%時(shí)生長(zhǎng)相對(duì)稍差一些，結(jié)合細(xì)胞數(shù)及粗蛋白2個(gè)項(xiàng)目指標(biāo)，果渣配比占整個(gè)物料的40%~70%時(shí)最適宜，此時(shí)發(fā)酵料細(xì)胞數(shù)及粗蛋白均較高，細(xì)胞數(shù)最高可達(dá)44億個(gè)/g以上，粗蛋白含量可達(dá)39%以上。

2.2 菌種配比對(duì)發(fā)酵的影響

設(shè)計(jì)3個(gè)菌種的不同配比，總接種量按10%加入，進(jìn)行培養(yǎng)情況觀察、培養(yǎng)物活菌細(xì)胞數(shù)及粗蛋白檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表4。

從表4可以看出，菌種的不同配比及加入量對(duì)發(fā)酵料的細(xì)胞數(shù)及粗蛋白有較大的影響，3個(gè)菌種同時(shí)加入時(shí)，菌體生長(zhǎng)最好，三個(gè)菌種同時(shí)在發(fā)酵料中生長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)可達(dá)到最大42.61億個(gè)/g，粗蛋白可達(dá)38%以上。產(chǎn)朊假絲酵母和白地霉對(duì)原料無(wú)機(jī)氮的轉(zhuǎn)化及菌體蛋白的提高有較大的影響，可以促進(jìn)無(wú)機(jī)氮轉(zhuǎn)化為有機(jī)氮，提高菌體蛋白含量。

2.3 培養(yǎng)基水分含量對(duì)發(fā)酵的影響

設(shè)計(jì)培養(yǎng)物不同的水分含量，進(jìn)行培養(yǎng)情況觀察、培養(yǎng)物活菌細(xì)胞數(shù)及粗蛋白檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表5。

從表5可以看出，培養(yǎng)料水分含量為50%~55%時(shí)菌體生長(zhǎng)情況較好，最適水分含量為55%，此時(shí)菌體生長(zhǎng)最好，發(fā)酵料細(xì)胞數(shù)及粗蛋白含量均較高。水分含量低于50%時(shí)菌體生長(zhǎng)變差；高于60%時(shí)生長(zhǎng)變慢，同時(shí)伴隨染雜菌現(xiàn)象。

2.4 培養(yǎng)料初始pH值的確定

設(shè)計(jì)初始pH值實(shí)驗(yàn)配方，用1mol/l的HCl或1mol/l NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)料的起始pH值，對(duì)培養(yǎng)料進(jìn)行生長(zhǎng)情況觀察、培養(yǎng)物活菌細(xì)胞數(shù)及粗蛋白檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表6。從表6可知，原料起始pH值對(duì)培養(yǎng)的影響較大，最適pH值為4.5~5.0，三個(gè)菌種均能生長(zhǎng)較好，菌體生長(zhǎng)前期既能較快繁殖達(dá)到一定菌數(shù)，且后期菌體亦生長(zhǎng)較好，pH值為5.0時(shí)細(xì)胞數(shù)及粗蛋白含量均較高。pH值較低時(shí)菌體生長(zhǎng)較慢，細(xì)胞數(shù)較低，pH值過(guò)高菌體前期生長(zhǎng)快，但后期易染雜菌，導(dǎo)致生長(zhǎng)變差無(wú)法檢測(cè)。

2.5 接種量的確定

3個(gè)菌種按照同樣的比例加入，設(shè)計(jì)不同的接種總量，對(duì)培養(yǎng)料進(jìn)行生長(zhǎng)情況觀察及活菌細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

從圖1可見(jiàn)，隨著接種量的增加，發(fā)酵料菌體生長(zhǎng)速度隨之變快，當(dāng)接種量達(dá)到6%時(shí)，達(dá)到最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞數(shù)最高可達(dá)45億個(gè)/g以上，隨著接種量的增加，產(chǎn)品細(xì)胞數(shù)不再明顯增加，物料菌體生長(zhǎng)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，由此可以確定接種量6%為最適接種量。

2.6 無(wú)機(jī)氮源轉(zhuǎn)化率實(shí)驗(yàn)

酵母可將培養(yǎng)基中氨態(tài)氮的2/3轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)氮，具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)化無(wú)機(jī)氮源的能力，以滿足菌體生長(zhǎng)發(fā)育的需要，提高菌體蛋白的含量。本實(shí)驗(yàn)以尿素作為無(wú)機(jī)氮源，其添加量及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7。

從表7中可以看出，當(dāng)尿素添加量為3%時(shí)，轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)86.01%，同時(shí)純蛋白較高，達(dá)31.59%，確定尿素添加量為3%時(shí)最適宜。

2.7 培養(yǎng)周期的確定

從培養(yǎng)開(kāi)始，每隔4h取樣一次，測(cè)定培養(yǎng)料不同時(shí)間的活菌細(xì)胞數(shù)，見(jiàn)圖2。

由圖2可見(jiàn)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，產(chǎn)品細(xì)胞數(shù)隨之增加，至44~48h左右時(shí)，細(xì)胞數(shù)相對(duì)穩(wěn)定，可達(dá)45億個(gè)/g左右，不再大幅增加，因此培養(yǎng)周期可確定為44~48h。

2.8 對(duì)蛋雞生長(zhǎng)性能的影響

在蛋雞日糧中添加不同比例的發(fā)酵沙棘果渣進(jìn)行飼喂實(shí)驗(yàn)，分別統(tǒng)計(jì)日產(chǎn)蛋率、平均蛋重、蛋黃色澤、破損量、軟蛋量、料蛋比、只日采食量等，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8。