乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞的研究表明可提高蛋雞抗氧化能力和免疫功能
引言
在畜牧業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)長期大量不合理使用抗菌藥物，會(huì)導(dǎo)致藥物殘留、細(xì)菌耐藥性等問題，嚴(yán)重影響畜牧、水產(chǎn)品的安全質(zhì)量。此外，抗生素可通過生物富集或水體等途徑進(jìn)人人體，影響人類的健康安全。我國從2015年提出停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星等四種喹諾酮類抗菌藥物到2020年飼料中全面禁抗，如何保障畜禽腸道健康成為業(yè)內(nèi)關(guān)注的焦點(diǎn)問題，人們不斷探索酸化劑、益生元、益生菌、植物提取物以及中草藥替代抗菌藥物的可行性。乳酸菌是廣泛存在于動(dòng)物腸道中具有重要生理功能的菌群，給動(dòng)物飼喂乳酸菌制劑，能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，改善腸道健康，提高機(jī)體免疫力，發(fā)揮抗菌作用，提高飼料利用率和動(dòng)物生產(chǎn)性能。發(fā)現(xiàn)，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgG和新城疫免疫抗體水平。研究表明，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgA水平。研究表明，在飼料中添加植物乳桿菌可提高肉雞血液IgA、IgG、IFN-y、IL-2和IL-6水平。給雛雞灌服植物乳桿菌液可顯著提高雛雞血液中新城疫免疫抗體效價(jià)。體外細(xì)胞試驗(yàn)證明，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有較強(qiáng)的清除自由基的能力，且植物乳桿菌優(yōu)于嗜酸乳桿菌。通過體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌IBM1具有較強(qiáng)的抗氧化能力。植物乳桿菌代謝產(chǎn)物能顯著提高肉仔雞血清中SOD和GSH-Px的活性。前期研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料以15%比例替換蛋雞配合飼料，可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，提高經(jīng)濟(jì)效益，但其作用機(jī)制尚不明確。本試驗(yàn)旨在研究植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞血液抗氧化指標(biāo)及疫苗免疫抗體水平以、主要臟器指數(shù)的影響，為乳酸菌發(fā)酵飼料在蛋雞生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)。
材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
1.1.1乳酸菌發(fā)酵原液
乳酸菌發(fā)酵原液，主要由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌等乳酸菌混合培養(yǎng)而成，有效微生物20億/mL，陰涼避光處保存，保質(zhì)期12個(gè)月。
1.1.2試劑盒
禽流感H9N1抗體(AIV-H9N 1Ab)檢測試劑盒、雞新城疫抗體(NDV Ah)檢測試劑盒購自上海勁馬科技生物有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）測試盒(WST-1法)、丙二醛(MDA )測定試劑盒(TBA法)、谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-Px )、總抗氧化能力(T-AOC)測試盒購自南京建成生物工程研究所。
1.1.3儀器設(shè)備
MK3酶標(biāo)儀；UV-2600i紫外可見光分光光度計(jì)。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物與處理
選取288只37周齡健康的海蘭蛋雞，隨機(jī)分為4組，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)12羽蛋雞。第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧(表1)；第2、3、4組為試驗(yàn)組，分別飼喂含5%乳酸菌發(fā)酵飼料+95%基礎(chǔ)日糧、10%乳酸菌發(fā)酵飼料+90%基礎(chǔ)日糧和15%乳酸菌發(fā)酵飼料+85%基礎(chǔ)日糧的混合日糧。預(yù)試期7天，試驗(yàn)期60天。
注:復(fù)合預(yù)混料為每千克日糧提供銅8.00mg，鐵60.00mg，錳60.60mg，鋅80.00mg，硒030 mg，碘0.48mg，維生索A8000IU，維生索D32000IU，維生索E40，維生索K33.45 mg，維生索B10.8mg，維生索B23.7Smg，泛酸5.40mg，煙酸20.00mg，葉酸0.45mg，生物索0.10mg。
1.3飼養(yǎng)管理
試驗(yàn)雞自由采食和飲水。每天光照16小時(shí)，采用人工光照和自然光照相結(jié)合。采用蛋雞常規(guī)飼養(yǎng)管理和常規(guī)免疫。
1.4乳酸菌發(fā)酵飼料的制作
將基礎(chǔ)日糧與乳酸菌發(fā)酵液按照一定比例混合均勻，壓實(shí)，裝人發(fā)酵袋內(nèi)、密封，在環(huán)境溫度為20℃的條件下厭氧發(fā)酵15天。開袋后有乳酸香味即可使用。
1.5檢測指標(biāo)與方法
1.5.1血液抗氧化指標(biāo)及免疫抗體檢測試驗(yàn)至30、60天，每重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，每組6只雞，翅靜脈采血5mL，肝素抗凝，3000r/min離心10min后收集血漿，分裝，-20℃冷凍保存，備用。
用酶聯(lián)免疫吸附法測定蛋雞血漿AIV-H9N1Ab、NDVAb。比色法測定血漿SOD活性、MDA、GSH-Px、T-AOC含量。
1.5.2臟器指數(shù)的測定
試驗(yàn)至60天，每重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，每組6只雞，然后將雞宰殺取其肝臟、心臟、脾臟，分別稱重，計(jì)算臟器指數(shù)。
臟器指數(shù)=臟器重(g)/體重(kg)。
1.5.3腸壁厚度測定試驗(yàn)至60天，每重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，分別從U字型十二直腸的底部和空腸中央部截取相同長度的十二直腸和空腸，分別用游標(biāo)卡尺測量其厚度。
1.6數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS9.20軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果用“平均值士標(biāo)準(zhǔn)差”表示。
結(jié)果
2.1乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞血槳抗氧化能力的影響
試驗(yàn)至30天，第4組蛋雞血漿T-AOC顯著高于對(duì)照組，SOD活性極顯著高于對(duì)照組及第2組(P<0.01)；MDA的含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。第3、4組GSH-Px含量顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。
試驗(yàn)至60天，第4組蛋雞血漿T-AOC顯著高于對(duì)照組和第2組(P<0.05)，第4組蛋雞血漿SOD活性極顯著高于對(duì)照(P<0.01)，第2、3組蛋雞血漿SOD活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)組蛋雞血漿MDA的含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，第4組顯著低于第2組(P<0.05)。第3、4組GSH-Px含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(表2)。
差異極顯著(P<0.01)；下同。
2.2乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞血槳AIV-H9N1及NDV杭體水平的影響
試驗(yàn)至30天，第2、4組蛋雞血漿AIV-H9N 1抗體水平極顯著高于對(duì)照組及第3組(P<0.01)；試驗(yàn)至60d，第2、3組蛋雞血漿AIV-H9N1抗體水平極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。
試驗(yàn)至30天，第2~4組蛋雞血漿NDV抗體水平極顯著高于對(duì)照組，第4組極顯著高于第2、3組(P<0.01)；試驗(yàn)至60天，第2、3組蛋雞血漿NDV抗體水平極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，第4組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(表3)。
2.3乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞臟器指數(shù)的影響
由表4可見，第2、4組蛋雞的心臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組及第3組(P<0.05)；試驗(yàn)組的肝臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；第4組的脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組及第2組(P<0.05)。
2.4乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞十二指腸和空腸厚度的影響
試驗(yàn)至60天，第2~4組蛋雞十二指腸彎曲部厚度和空腸中央部厚度與對(duì)照組差異不顯著，(P>0.05)(表5)。
討論
3.1乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞杭氧化能力的影響
體外或動(dòng)物試驗(yàn)也已證明，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有清除活性氧的作用。等體外細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有較強(qiáng)的清除自由基的能力，且植物乳桿菌優(yōu)于嗜酸乳桿菌。體外試驗(yàn)證明，從傳統(tǒng)發(fā)酵飲料中分離的植物乳桿菌DMs清除自由基的作用更強(qiáng)。體外試驗(yàn)證明，嗜酸乳桿菌清除能力相對(duì)較強(qiáng)。通過體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌KM1具有較強(qiáng)的抗氧化能力。研究認(rèn)為植物乳桿菌KM1通過改變磷酸苷油激酶。α-甘油磷酸氧化酶、丙酮酸氧化酶和NADH過氧化物酶的表達(dá)水平來緩解氧化應(yīng)激。植物乳桿菌JLAU103中分離、純化一種酸性胞外多糖(EPS )，體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)自由基具有較強(qiáng)的清除能力。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌KLDS 1.0386具有清除經(jīng)自由基和脂質(zhì)抗氧化能力。植物乳桿菌KLDS 1.0386顯著降低了LPS對(duì)小鼠肝組織損傷、TNF-α和IL-6水平以及髓過氧化物酶(MPO)活性。報(bào)道，植物乳桿菌代謝產(chǎn)物能顯著提高肉仔雞血清中SOD和GSH-Px活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，給蛋雞飼喂含5%、10%和15%植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料的混合日糧，可顯著提高蛋雞血漿SOD、GSH-Px和T-AOC活性，顯著降低血漿MDA含量，反映了飼喂植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料能提高機(jī)體清除自由基的能力和降低脂肪氧化損傷，對(duì)細(xì)胞和組織具有顯著的保護(hù)作用。可見，利用植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料飼喂蛋雞是十分有益的。
3.2乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞禽流感和新城疫免疫杭體水平的影響
將植物乳桿菌或嗜酸乳桿菌添加飲水或飼料中，可提高家禽的免疫功能。報(bào)道，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgG和新城疫免疫抗體水平。報(bào)道，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgA水平。在飼料中添加植物乳桿菌，提高了肉雞血液IgA、IgG、IFN-y、IL -2和IL-6水平。給雛雞灌服植物乳桿菌液，可顯著提高雛雞血液中新城疫免疫抗體效價(jià)。用嗜酸乳桿菌培養(yǎng)液給雛雞飲水，顯著提高了血清IgG和新城疫疫苗免疫抗體水平。給肉雞飼喂添加植物乳桿菌L-137的飼料，顯著提高了肉雞脾臟IL-12β、IFN-β和IFN-y的基因表達(dá)水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在蛋雞日糧中飼喂乳酸菌發(fā)酵飼料均能提高禽流感H9N1抗體水平，試驗(yàn)至30天，第2、4組極顯著高于對(duì)照組，試驗(yàn)至60天，試驗(yàn)組極顯著或顯著高于對(duì)照組。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)試驗(yàn)組新城疫抗體水平極顯著或極顯著高于對(duì)照組?？梢姡o蛋雞飼喂植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料可提高蛋雞疫苗免疫抗體水平，提高蛋雞的抗病力，值得推廣應(yīng)用。
3.3乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞臟器指數(shù)的影響
本試驗(yàn)結(jié)果表明，用乳酸菌發(fā)酵飼料替換基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)雞脾臟指數(shù)呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢，15%乳酸菌發(fā)酵飼料+85%基礎(chǔ)日糧組蛋雞的脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組。在肉雞飼料中添加植物乳桿菌，可顯著提高脾臟指數(shù)。給肉雞飲用植物乳桿菌菌液，脾臟指數(shù)也呈現(xiàn)明顯的增加趨勢。研究了副干酪乳桿菌KL1和植物乳桿菌亞種的作用，發(fā)現(xiàn)與自痢沙門氏菌感染組相比，益生菌治療組和益生菌預(yù)防組農(nóng)大3號(hào)矮種雞的脾臟指數(shù)顯著增加。在雞飲水中添加0.3%的乳酸菌微生態(tài)制劑，與對(duì)照組雞比較，脾臟指數(shù)提高了67.14%。在基礎(chǔ)日糧中分別添加1.0%、2.0%的乳酸凍干菌菌粉，肉雞脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組。顯然，以植物乳桿菌為代表的乳酸菌具有提高脾臟體重比的作用，與其增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能的作用是一致的。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼喂乳酸菌發(fā)酵飼料，提高了蛋雞禽流感和新城疫疫苗免疫抗體水平，與脾臟指數(shù)提高有明顯的一致性。其原因可能是免疫器官發(fā)育是機(jī)體免疫功能的組織學(xué)基礎(chǔ)。但是，乳酸菌對(duì)免疫器官發(fā)育的影響受乳酸菌種類和攝人量的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，三株乳酸菌培養(yǎng)物均能顯著提高肉雞脾臟指數(shù)，其中兩株乳酸菌培養(yǎng)物顯著提高胸腺指數(shù)，一株乳酸菌培養(yǎng)物顯著提高法氏囊指數(shù)。報(bào)道，在飼料中添加1.0 x 108 CFU/g約氏乳桿菌，對(duì)育成期蛋雞脾臟指數(shù)沒有顯著的影響。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼喂5%乳酸菌發(fā)酵飼料+95%基礎(chǔ)日糧組、10%乳酸菌發(fā)酵飼料+90%基礎(chǔ)日糧組，蛋雞脾臟指數(shù)與對(duì)照組沒有顯著差異?？梢?，菌種、劑量選擇是至關(guān)重要的。
本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用5%~15%乳酸菌發(fā)酵飼料替換基礎(chǔ)日糧，蛋雞肝臟指數(shù)顯著低于基礎(chǔ)日糧組，與已有報(bào)道不一致。在飼料中添加植物乳桿菌，對(duì)肉雞肝臟指數(shù)沒有顯著影響。報(bào)道，在育成期蛋雞飼料中添加1.0x108 CFU/g約氏乳桿菌，對(duì)肝臟指數(shù)沒有顯著的影響?？赡芘c本試驗(yàn)用乳酸菌發(fā)酵飼料替換基礎(chǔ)日糧，導(dǎo)致試驗(yàn)組飼料能量水平低于對(duì)照組有關(guān)。也可能與植物乳桿菌或嗜酸乳桿菌及其代謝產(chǎn)物影響了肝臟脂肪代謝有關(guān)。給大鼠灌胃1.05x109、2.10x109、4.20x109 cfu/(kg·d)的乳酸菌懸液，其肝臟TG顯著低于肥胖組大鼠(陽性對(duì)照)，高劑量組大鼠的肝體比顯著降低。關(guān)于乳酸菌影響動(dòng)物脂肪代謝的菌株篩選、有效劑量、作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
結(jié)論
蛋雞飼糧中添加植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料，可提高蛋雞抗氧化能力和免疫功能，以添加15%最佳。
本產(chǎn)品所用的EM復(fù)合有益微生物菌種是經(jīng)過提純復(fù)壯高濃度菌種，配以針對(duì)性的復(fù)合菌種專業(yè)培養(yǎng)基，能夠生產(chǎn)出高濃度約50公斤的EM活菌原液，每公斤成本幾毛錢。
【原料組成】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌等，葡萄糖與載體等。
【產(chǎn)品成分分析保證值】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌復(fù)合益生菌合計(jì)≥200億cfu/g，水分＜9.0%。凈含量200g/包。
EM菌是一種多功能的復(fù)合益生菌，目前幾乎在世界上的所有國家進(jìn)行推廣使用，可廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)畜牧業(yè)、環(huán)保、種植業(yè)等領(lǐng)域。主要作用簡單介紹如下：
視頻——神奇的EM技術(shù)
1.在種植上制作生物防蟲液,防治蟲害還能促長，減少種植蔬果的細(xì)菌與真菌病害；
2.生物菌肥制作，生產(chǎn)自然的有機(jī)果蔬產(chǎn)品；
3.改善環(huán)境衛(wèi)生，下水道、臭水池、垃圾發(fā)酵、廁所除臭等環(huán)保領(lǐng)域使用量大。除異臭臭味，凈水質(zhì)，清潔空氣，改善環(huán)境；
4.提高魚蝦禽畜的健康水平，凈化水質(zhì)控制有害病菌，節(jié)省藥物開支；
5.養(yǎng)殖上能夠降低料耗提高肉料比，節(jié)省飼料降低養(yǎng)殖成本；
6.發(fā)酵分解飼料中的有機(jī)物，提供適口性與提高高效代謝營養(yǎng)組分；
7.排毒清腸，提高肉、蛋、奶等產(chǎn)品品質(zhì)，提升經(jīng)濟(jì)效益；
8.發(fā)酵飼料，各種飼料、農(nóng)產(chǎn)品加工下腳料、食品加工糟渣通過發(fā)酵后變成優(yōu)質(zhì)飼料降低飼料成本。
【操作方法】
在非金屬容器中將本產(chǎn)品1包與1公斤紅糖一起溶入50公斤約35℃的溫水中后密封放在室溫25℃以上的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，僅需24-48小時(shí)即可完成培養(yǎng)（PH值在3.5左右），常溫下3個(gè)月內(nèi)每毫升含復(fù)合益生菌在100-300億，時(shí)間越長菌種數(shù)量會(huì)隨之下降。密封可以保存一年以上，但3個(gè)月內(nèi)使用效果更好。
【使用方法】
生產(chǎn)完成的EM活菌使用方法、效果與大部分市場上銷售的EM菌類產(chǎn)品基本上無明顯差異，但由于自制的EM菌液成本低、活性高，不需要再用紅糖激活等即可直接使用，方便且成本低，因此可以適當(dāng)提高使用量能夠達(dá)到更好的效果。
1.動(dòng)物飲水或拌料：按照每噸飲水或飼料中添加1公斤以上的使用量添加，最高使用量不超過5公斤。
2.魚塘潑灑：每畝使用約5公斤（選擇不下雨的晴天使用，使用后注意增氧）；小水體養(yǎng)殖龜鱉、蛙類等水產(chǎn)動(dòng)物，根據(jù)情況每2-7天潑灑一次，每100平方米面積使用0.5-1公斤。
3.制作發(fā)酵飼料或青貯飼料：根據(jù)不同物料每噸使用5-10公斤，制作時(shí)添加10%的玉米粉或其它能量飼料一起發(fā)酵效果更好（制作青貯飼料不需要添加）。
4.環(huán)境除臭、下水道異味、養(yǎng)殖場（欄舍內(nèi)與糞污堆放處）、糞水池、廁所等，稀釋30倍噴灑，噴灑到動(dòng)物身體上、人體上無害。
5.制作有機(jī)肥：每噸堆肥中運(yùn)用5公斤以上，水肥制作每噸添加2公斤以上。
6.澆灌農(nóng)作物時(shí)每噸水中添加1公斤能夠促進(jìn)植物的健康水平；噴灑植物葉面每100公斤水中添加2公斤能夠促進(jìn)作物的光合作用和健康水平（可以與葉面肥一起使用）。
廣西助農(nóng)畜牧科技有限公司有7個(gè)專業(yè)現(xiàn)代生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)實(shí)戰(zhàn)型團(tuán)隊(duì)，為全國養(yǎng)殖場進(jìn)行非洲豬瘟防控技術(shù)、現(xiàn)代循環(huán)生態(tài)養(yǎng)殖場的規(guī)劃、設(shè)計(jì)、建設(shè)、整改等服務(wù)；養(yǎng)殖場環(huán)保問題低成本解決方案（養(yǎng)殖場惡臭、氨氣，蒼蠅、污水、糞污資源化、病死動(dòng)物無害化處理）與專業(yè)配套產(chǎn)品。幫助政府部門完成現(xiàn)代生態(tài)養(yǎng)殖、糞污資源化、病死動(dòng)物無害化處理、糧改飼、秸稈綜合利用、牧草產(chǎn)業(yè)等達(dá)標(biāo)工作、培訓(xùn)工作（免費(fèi)且有專業(yè)資料等），針對(duì)您當(dāng)?shù)刂贫▽I(yè)方案，做出示范樣板后確定效果再進(jìn)行推廣。
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廣西助農(nóng)公司有著20余年的生物發(fā)酵飼料經(jīng)驗(yàn)，能夠針對(duì)你的養(yǎng)殖場做出最適合的模式，我們的發(fā)酵技術(shù)不僅設(shè)施投資簡單（僅需塑料袋或塑料容器等即可），且發(fā)酵成功率很高。最關(guān)鍵是制作出來的發(fā)酵飼料品質(zhì)比一般更好（得益于先進(jìn)的酶菌結(jié)合發(fā)酵劑與經(jīng)驗(yàn)總結(jié)），能夠?yàn)槟闵a(chǎn)出低成本、養(yǎng)殖環(huán)保無抗優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物產(chǎn)品出來，大量成功案例可以驗(yàn)證。提供上門服務(wù)（快速解決家禽養(yǎng)殖上的疾病、環(huán)保、肉品質(zhì)等問題）。
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