3 試驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東溢多利生物科技股份有限公司產(chǎn)學(xué)研基地室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行試驗(yàn)魚以重復(fù)為單位飼養(yǎng)于試驗(yàn)缸每個(gè)試驗(yàn)缸內(nèi)大小為0.6m×0.7m×0.7m(有效水體250L)。飼養(yǎng)期間，每天定時(shí)定點(diǎn)投喂(08:30、12:30和16:30)，投喂30 min后收集剩料，烘干稱重，并根據(jù)攝食情況調(diào)整投喂量。飼養(yǎng)期間，每日吸污，同時(shí)更換1/10~3/10的水量；水溫保持在(27.0±2.0) ℃，pH保持在7.0±0.5，溶解氧濃度>6mg/L。

4 指標(biāo)測定

4.1 生長性能指標(biāo)

分別在正式試驗(yàn)開始前和結(jié)束后，對各組試驗(yàn)魚進(jìn)行計(jì)數(shù)和稱重，計(jì)算體增重率(weight gain rate, WGR)、特定生長率(specific growth rate, SGR)、攝食量(feed intake, FI)、飼料系數(shù)(feed conversion rate, FCR)。各指標(biāo)計(jì)算公式如下：

WGR(%) =100×[試驗(yàn)?zāi)┲?g) -試驗(yàn)初重(g)]/試驗(yàn)初重(g)；

SGR(%) =100×[ln試驗(yàn)?zāi)┲?g) -ln試驗(yàn)初重(g)]/試驗(yàn)天數(shù)(d)；

FCR=攝食量(g) /增重(g) 。

4.2 飼料、全魚常規(guī)營養(yǎng)成分分析

養(yǎng)殖試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)魚分別饑餓24 h，用干毛巾吸干魚體表面的水分后稱重。在養(yǎng)殖試驗(yàn)開始前，取6尾魚進(jìn)行初始全魚營養(yǎng)成分分析。在56 d的養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每缸取2尾魚(每組6尾)，用自封袋裝好后置于-20 ℃冰箱中保存，用于全魚營養(yǎng)成分分析。飼料、魚體的常規(guī)營養(yǎng)成分含量采用AOAC(1995)法測定，具體方法如下：在105 ℃烘箱中烘至恒重后測定水分含量；分別采用凱氏定氮法(氮×6.25)和索氏提取法測定粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量；在馬弗爐中灼燒(550℃)后測定粗灰分含量；分別采用乙二胺四乙酸(EDTA)絡(luò)合滴定法和鉬黃比色法測定鈣、磷含量。

4.3 營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率測定

在養(yǎng)殖試驗(yàn)開始后2周，每天在投喂后采用虹吸的方法收集糞便，每天收集2次。然后用鑷子選擇新鮮、完整的、外表帶有包膜的糞便于-20 ℃冰箱中保存。試驗(yàn)結(jié)束后將收集到的糞便集中，并在烘箱中烘干(60 ℃)備用。測定糞便中粗蛋白質(zhì)、鈣、磷以及飼料和糞便中釔含量，其中釔含量的測定采用等離子體發(fā)射光譜法，其他指標(biāo)的測定方法同1.4.2。營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的計(jì)算公式如下：

干物質(zhì)表觀消化率(%)=100×[1-(飼料中Y2O3含量/糞便中Y2O3含量)]；

某營養(yǎng)物質(zhì)(粗蛋白質(zhì)、鈣或磷)表觀消化率(%)=100×[1-(糞便中該營養(yǎng)物質(zhì)含量/飼料中該營養(yǎng)物質(zhì)含量)×(飼料中Y2O3/糞便中Y2O3含量)]。

4.4 血清生化指標(biāo)測定

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選擇15尾魚，用經(jīng)肝素鈉試劑潤洗后的注射器尾靜脈采血，離心制備血清后存儲于-80 ℃冰箱中。血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxalacetic transaminase, GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamate pyruvate transaminase, GPT)、溶菌酶(lysozyme, LZM)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定，具體測定步驟參照試劑盒說明書。

4.5 腸道消化酶活性測定

快速分離經(jīng)采血后魚體的腸道，再用液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱中。腸道中消化酶如胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、淀粉酶(amylase)、脂肪酶(lipase)活性以及上清液中蛋白質(zhì)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定，具體測定步驟參照試劑盒說明書。

5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

本試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 18.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并結(jié)合Duncan氏法對組間數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，以P<0.05作為差異顯著水平。

結(jié)果與分析

1 生長性能

由表3可知，低磷低魚粉組的WGR和SGR均顯著低于對照組(正常磷和正常魚粉組，下同)(P<0.05)。與低磷正常魚粉組相比，在其飼料中添加植酸酶能夠使WGR提高11.03%(P<0.05)、SGR提高4.71%(P<0.05)、FCR降低9.60%(P

2 體成分

由表4可知，低磷低魚粉組的全魚鈣和磷含量均顯著低于對照組(P<0.05)。與低磷正常魚粉組和正常磷低魚粉組相比，在其飼料中分別添加植酸酶和蛋白酶均能夠顯著提高全魚鈣和磷含量(P

3 腸道消化酶活性

由表5可知，低磷低魚粉組的胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性顯著低于對照組(P<0.05)。與低磷正常魚粉組和正常磷低魚粉組相比，在其飼料中分別添加植酸酶和蛋白酶均能夠顯著提高胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性(P

4 營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率

由表6可知，低磷低魚粉組的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和磷的表觀消化率均顯著低于對照組(P<0.05)。與低磷正常魚粉組和正常磷低魚粉組相比，在其飼料中分別添加植酸酶和蛋白酶均能夠顯著提高干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和磷的表觀消化率(P

5 血清生化指標(biāo)

由表7可知，低磷低魚粉組的LZM活性顯著低于對照組(P<0.05)，而MDA含量顯著高于對照組(P<0.05)。與低磷正常魚粉組和正常磷低魚粉組相比，在其飼料中分別添加植酸酶和蛋白酶均能夠顯著提高LZM活性和降低MDA含量(P

討論

1 低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶對草魚生長性能的影響

在飼料中添加酶制劑既能降解植物性飼料原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，同時(shí)還可彌補(bǔ)機(jī)體內(nèi)源消化酶的不足，從而促進(jìn)動物對飼料的消化利用，提高飼料報(bào)酬，促進(jìn)生長。植酸酶可有效降解飼料中的植酸，不僅釋放出與之螯合的磷，同時(shí)還可將鈣和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)釋放出來供動物吸收利用，減少氮、磷的排泄，提高營養(yǎng)物質(zhì)利用率，從而促進(jìn)動物生長。張曉清等的研究表明，添加300 mg/kg植酸酶能夠提高建鯉的體增重。Lu等的研究表明，添加200 mg/kg植酸酶能夠促進(jìn)黑鯛的生長，且可以使飼料中磷酸二氫鈣的水平從1.5%降至1.0%。在以植物蛋白質(zhì)為主要蛋白質(zhì)源的飼料中，添加植酸酶能夠促進(jìn)植酸磷水解，促進(jìn)鯽魚(Carassius auratus)生長。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，低磷飼料中添加300 mg/kg植酸酶能夠提高草魚的WGR和SGR，促進(jìn)生長。這可能是因?yàn)樘砑拥闹菜崦附到饬孙暳显现械闹菜?，釋放出的營養(yǎng)物質(zhì)改善了草魚的營養(yǎng)狀態(tài)，從而達(dá)到了促進(jìn)生長的作用。蛋白酶能夠通過水解植物性蛋白質(zhì)原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高水解產(chǎn)物中易被消化吸收利用的氨基酸的含量，還能激活內(nèi)源消化酶活性，從而提高動物對植物性蛋白質(zhì)的利用率。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，低魚粉飼料中添加500 mg/kg蛋白酶同樣能夠提高草魚的WGR和SGR，促進(jìn)其生長。Li等在羅非魚上的研究顯示，飼料中添加175 mg/kg的蛋白酶能夠顯著提高增重，改善生長性能。在虹鱒上的試驗(yàn)結(jié)果表明，低魚粉飼料中添加175 mg/kg蛋白酶能夠提高WGR和降低FCR，且提高率和降低率分別達(dá)到9.42%和7.80%。在異育銀鯽上的試驗(yàn)也有相似的研究結(jié)果，低魚粉飼料中添加不同水平的蛋白酶(120、150和175 mg/kg)均能提高其體增重，且提高率分別達(dá)到5.73%、22.40%和14.38%。但在虹鱒的報(bào)道中顯示，飼料中添加蛋白酶對虹鱒的生長性能無顯著影響。不同試驗(yàn)結(jié)果存在差異可能與試驗(yàn)飼料類型，試驗(yàn)魚種類、大小，酶制劑來源和養(yǎng)殖環(huán)境不同有關(guān)。

目前，植酸酶和蛋白酶的復(fù)合使用在部分水產(chǎn)動物上已有報(bào)道。在建鯉上的試驗(yàn)表明，低磷(1.5%→1.0%)無魚粉(6%→0)飼料中添加植酸酶和蛋白酶能夠使WGR提高8.88%。在羅非魚上的試驗(yàn)表明，低磷(1.8%→1.2%)無魚粉(6%→0)飼料中添加植酸酶和蛋白酶能夠使WGR提高13.03%。草魚是我國主要大宗水產(chǎn)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類，其肌肉中含有豐富的多不飽和脂肪酸，具有重要的保健功能，深受消費(fèi)者的喜歡。本研究結(jié)果顯示，在低磷(2.0%→1.3%)低魚粉(3.0%→1.5%)飼料中添加植酸酶和蛋白酶能夠提高草魚的WGR和SGR，且提高率分別達(dá)到15.71%和6.87%，此結(jié)果與上述學(xué)者的研究結(jié)果相似，表明飼料中添加植酸酶和蛋白酶能夠促進(jìn)動物生長，說明不同酶制劑的配伍使用使得酶功能產(chǎn)生了協(xié)同作用，發(fā)揮了較大的經(jīng)濟(jì)效益。但是，與對照組相比，低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶后各生長指標(biāo)還是低于對照組，這可能是由于降低了魚粉在飼料中的使用量，導(dǎo)致魚粉中一些微量營養(yǎng)元素不能滿足魚體生長所需，從而造成些許差異。

2 低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶對草魚體成分的影響

關(guān)于植酸酶和蛋白酶對動物體成分的影響已有諸多研究報(bào)道。Shi等的研究顯示，在低魚粉飼料中添加不同水平的蛋白酶(120、150和175 mg/kg)，對異育銀鯽體成分(水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量)無顯著影響。Lin等的研究顯示，飼料中添加由蛋白酶、β-葡聚糖酶和木聚糖酶組成的復(fù)合酶制劑對羅非魚全魚水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量無顯著影響。張曉清等的研究顯示，低磷無魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶對建鯉全魚水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無顯著影響。此外，張瑞的研究顯示，飼料中添加植酸酶能夠提高建鯉肌肉粗蛋白質(zhì)含量，但對粗脂肪和粗灰分含量無顯著影響。張璐等在大黃魚上的研究也有類似的結(jié)果，飼料中添加200 mg/kg植酸酶對全魚粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量和總能無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組之間在草魚全魚水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量方面均無顯著差異，該結(jié)果可能說明魚類的營養(yǎng)組成相對穩(wěn)定，不易受到飼養(yǎng)環(huán)境和營養(yǎng)條件的影響；但低磷低魚粉組全魚鈣、磷含量要低于對照組，表明低磷低魚粉組中的鈣、磷不能滿足魚體的生長需要，從而導(dǎo)致生長性能的下降；而在低磷低魚粉飼料中補(bǔ)充植酸酶和蛋白酶后，其鈣、磷的營養(yǎng)狀況有所改善。這說明植酸酶和蛋白酶在水解飼料原料時(shí)，會釋放出鈣、磷等營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)礦物元素的沉積，從而提高動物對營養(yǎng)物質(zhì)的利用。

3 低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶對草魚營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

飼料的營養(yǎng)價(jià)值是影響動物生長的重要因素，而生產(chǎn)上常用消化率來評價(jià)飼料的營養(yǎng)價(jià)值，進(jìn)而考察其對動物生長的影響。動物的生長與干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率呈正相關(guān)。Biswas等的研究發(fā)現(xiàn)，在用豆粕部分替代魚粉的飼料中添加2000 U/kg植酸酶，能夠顯著提高真鯛(Pagrus major)蛋白質(zhì)和磷的表觀消化率，且分別較豆粕對照組提高3.26%和60.04%。在斑點(diǎn)叉尾鮰上的試驗(yàn)表明，飼料中添加植酸酶能夠提高粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和磷的表觀消化率。同樣，在羅非魚上也有相似的研究結(jié)果。在以豆粕、葵籽粕和菜籽粕分別部分替代魚粉的飼料中添加蛋白酶、葡聚糖酶和木聚糖酶能夠提高虹鱒的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪表觀消化率。在異育銀鯽上的試驗(yàn)表明，飼料中添加蛋白酶能夠提高干物質(zhì)和蛋白質(zhì)的表觀消化率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶能夠提高草魚對干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、鈣和磷的表觀消化率。這可能是由于植酸、蛋白酶抑制因子等抗?fàn)I養(yǎng)成分對魚類的消化酶活性有抑制作用，從而抑制了營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。植酸酶和蛋白酶的添加一方面可以釋放出與植酸結(jié)合的營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)其消化吸收利用，另一方面也能夠激活部分內(nèi)源酶，從而改善腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用。因此，本試驗(yàn)繼續(xù)對植酸酶和蛋白酶對草魚腸道消化酶活性的影響進(jìn)行了研究。

4 低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶對草魚腸道消化酶活性的影響

動物的生長與消化能力密切相關(guān)，而消化能力受到消化酶活性的影響。胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶以及脂肪酶是動物胃腸道中消化營養(yǎng)物質(zhì)的關(guān)鍵酶。Liu等的研究發(fā)現(xiàn)，外源脂肪酶的添加能夠通過提高草魚腸道中胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性提高草魚的消化能力，從而達(dá)到促進(jìn)生長的作用。關(guān)于植酸酶和蛋白酶對動物腸道消化酶活性的影響已有諸多報(bào)道。在異育銀鯽上的試驗(yàn)表明，飼料中添加植酸酶能夠提高肝胰臟和腸道蛋白酶活性。在鯉魚上的試驗(yàn)表明，低魚粉飼料中添加蛋白酶能夠高前腸和食糜蛋白酶活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在低磷正常魚粉飼料中添加植酸酶，正常磷低魚粉飼料中添加蛋白酶以及低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶均能在不同程度上提高草魚腸道中胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，與上述研究結(jié)果相似。其原因可能是植物蛋白質(zhì)源中含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子(植酸、蛋白酶抑制因子等)可與飼料中的蛋白質(zhì)、糖類和礦物質(zhì)等結(jié)合，導(dǎo)致底物釋放不徹底，對消化酶活性有抑制作用。而植酸酶和蛋白酶可水解飼料原料中的植酸和蛋白酶抑制因子，充分釋放結(jié)合部分，刺激機(jī)體內(nèi)源消化酶的分泌，從而提高消化酶活性。此外，在淀粉酶和脂肪酶上的研究顯示，飼料中添加植酸酶對鱸魚(Lateolabrax japonicus)胃和腸道中淀粉酶和脂肪酶的活性的影響不顯著。常青等的研究報(bào)道，蛋白酶的添加對魚體消化器官淀粉酶和脂肪酶的活性無顯著影響。本研究結(jié)果顯示，飼料中添加植酸酶和蛋白酶可提高腸道淀粉酶的活性，但對脂肪酶的活性無顯著影響。綜上所述，外源酶制劑的添加能夠通過提高消化酶活性，增強(qiáng)動物腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而促進(jìn)生長。而出現(xiàn)部分試驗(yàn)結(jié)果不一致的原因可能與酶的種類、用量，魚的品種、大小，飼料配方以及養(yǎng)殖環(huán)境有關(guān)。

5 低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶對草魚血清生化指標(biāo)的影響

血液中的有效成分可以反映機(jī)體新陳代謝機(jī)能、組織及細(xì)胞通透性和健康狀態(tài)。GOT和GPT主要參與機(jī)體組織中氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)。在本試驗(yàn)條件下，各組草魚血清中GOT和GPT活性無顯著差異，這與張曉清等在建鯉上的研究結(jié)果相似。LZM是魚類先天性免疫系統(tǒng)中的重要?dú)⒕镔|(zhì)，主要通過破壞病原菌的細(xì)胞壁，進(jìn)而導(dǎo)致病原菌裂解、死亡。MDA是體內(nèi)氧自由基攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸而產(chǎn)生的重要產(chǎn)物，可以反映細(xì)胞受損傷以及脂質(zhì)過氧化程度。Adeoye等研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加植酸酶、蛋白酶和木聚糖酶能夠增加羅非魚血清中LZM活性。另一篇在羅非魚上的研究也有相似的結(jié)果，飼料中添加木聚糖酶、蛋白酶、α-淀粉酶和纖維素酶能夠提高血清中LZM活性。而在鱘魚(Acipenser baeri Brandt ♀×A. schrenckii Brandt)上的試驗(yàn)表明，低魚粉飼料中添加植酸酶對血清LZM活性無顯著影響，但能降低血清MDA含量。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，低磷低魚粉飼料中添加植酸酶和蛋白酶能夠提高草魚血清中LZM活性和降低MDA含量。這些結(jié)果說明植酸酶和蛋白酶的添加能夠改善草魚的先天性免疫狀況。這可能是因?yàn)橹菜崦负偷鞍酌傅奶砑犹岣吡藙游矬w對蛋白質(zhì)及其他營養(yǎng)成分的利用率，同時(shí)也促進(jìn)了免疫相關(guān)因子的合成，進(jìn)而提高了機(jī)體的免疫力。

結(jié)論

在低磷(2.0%→1.3%)正常魚粉(3.0%)飼料中添加0.03%植酸酶、正常磷(2.0%)低魚粉(3.0%→1.5%)飼料中添加0.05%蛋白酶、低磷(2.0%→1.3%)低魚粉(3.0%→1.5%)飼料中添加0.03%植酸酶和0.05%蛋白酶均能夠提高草魚的營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率、腸道消化酶活性和免疫力，從而改善其生長性能。

養(yǎng)殖凈化酵素產(chǎn)品說明書

1000毫升/瓶，市場售價(jià)約120元，可以用于約10頭育肥豬或約200只家禽凈化體內(nèi)抗生素等殘留、改善肉蛋品質(zhì)（提升口感風(fēng)味）。純益生菌+酶制劑生物制品，無任何違禁物質(zhì)（客戶可以去質(zhì)檢部門進(jìn)行檢測，我們也可以為您提供質(zhì)檢報(bào)告）。

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⑧.效果極佳的“多功能增強(qiáng)型雙黃連散”原生中草藥組方 

⑨.一種快速促進(jìn)豬雞鴨快速生長增重的中草藥配方和運(yùn)用方法

10.豬場復(fù)產(chǎn)成功案例，防控非洲豬瘟運(yùn)用自制發(fā)酵中草藥更易成功，不需大設(shè)施投入成本低廉

11.創(chuàng)業(yè)養(yǎng)殖場先種好牧草，享受政策和降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)路更寬

12.2020年多年生禾本科高產(chǎn)牧草品種推薦，亞熱帶與大棚內(nèi)可四季產(chǎn)出，提供專業(yè)種植、加工、利用、形成生態(tài)循環(huán)一條龍服務(wù)

13.養(yǎng)殖場廢水（污水）最簡單的快速處理技術(shù)，達(dá)標(biāo)農(nóng)灌水或者變成無臭味不燒苗的液態(tài)有機(jī)肥技術(shù)

14.新建豬場用哪種模式好？新型水泡糞技術(shù)模式節(jié)約30%以上建設(shè)成本與減少70%以上糞污處理環(huán)保建設(shè)

15.豬場復(fù)養(yǎng)如何才能成功？推薦自制發(fā)酵中草藥組合拳模式！數(shù)百成功案例歡迎驗(yàn)證

16.豬場發(fā)現(xiàn)疑似感染非洲豬瘟后如何快速控制下來（20余天達(dá)到滿意效果，有大量成功案例）

17.養(yǎng)殖場托管找廣西助農(nóng)公司，無專業(yè)技術(shù)員也能夠高效益生產(chǎn)，總有一種模式適合你

18.養(yǎng)殖場環(huán)保與糞污資源化利用找廣西助農(nóng)公司，聯(lián)系我們