4 飼養(yǎng)管理與樣品采集

試驗魚暫養(yǎng)2周后,挑選大小基本一致、鱗片完整且采食正常的斜帶石斑魚270尾,初始體重為12.6g,隨機放入9個體積為100cm×60cm×80cm的網(wǎng)箱中,每個網(wǎng)箱30尾。將9個網(wǎng)箱同置于一個長方形水泥池中,隨機分成3組,每組3個網(wǎng)箱（重復(fù)）。飼養(yǎng)試驗持續(xù)8周,每天08:00和16:00進行飽食投喂,每2d進行1次吸糞,養(yǎng)殖水源為過濾海水,水溫22.5-30.0℃,溶解氧濃度大于5.7mg/L。

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后,經(jīng)過24h禁食,將每個網(wǎng)箱的試驗魚分別撈出稱重,每個網(wǎng)箱隨機撈取6條魚用MS-222麻醉,尾靜脈采血,全血（01%肝素鈉抗凝）收集在離心管中,離心（2500m/min）10min后收集血漿,于-80℃冰箱保存；采血后解剖取肝臟稱重后于-80℃冰箱保存。

5 指標(biāo)測定

5.1 生長性能指標(biāo)

根據(jù)試驗所測定和記錄的數(shù)據(jù)計算增重率（weight gain rate,WGR）、特定生長率（specific growth rate,SGR）、攝食率（daily feeding intake,DFI）飼料效率（feed efficiency ratio,FER）、肝體比（hepaticsomatic index,HSI）、成活率（survivalrate,SR）。生長性能指標(biāo)的計算公式如下：

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0；

特定生長率（%/d）=100×（lnWt-lnW0）/t；

攝食率（%/d）=100×Wf/（Wt/2+W0/2）/t；

肝體比（%）=100×W1/Wt；

成活率（%）=100×Nf/Ni。

式中:W0為試驗魚的初始體重（g）；Wt為試驗魚的終末體重（g）；Wf為攝食飼料的總量（g）；W1為肝臟重量（g）；t:為投喂天數(shù)（d）；Ni為試驗初始魚尾數(shù)；Nf為試驗終末魚尾數(shù)。

5.2 血漿生化指標(biāo)

血漿堿性磷酸酶（AKP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性與總膽固醇（T-CHO）、總蛋白（TP）含量采用相應(yīng)試劑盒測定,試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

5.3肝臟抗氧化指標(biāo)

肝臟過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量采用相應(yīng)試劑盒測定,試劑盒購于南京建成生物工程研究所。肝臟蛋白質(zhì)含量采用喹啉酸（BCA）法蛋白質(zhì)定量測試盒測定,測試盒購于南京建成生物工程研究所。

6 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SE）表示。采用SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析,先對數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗,如滿足方差齊性條件則對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（one-way ANOVA）,若組間存在顯著性差異,則采用 Duncan氏法進行多重比較檢驗組間差異顯著性,以P<0.05表示差異顯著。

結(jié)果

1 飼料中添加不同水平的發(fā)酵銀杏葉對斜帶石斑魚生長性能的影響

由表2可知，包含增重率、特定生長率、肝體比在內(nèi)的各生長性能指標(biāo)在各組之間均沒有顯著差異（P>0.05）。

2 飼料中添加不同水平的發(fā)酵銀杏葉對斜帶石斑魚血漿生化指標(biāo)的影響

由表3可知,飼料中添加0.25%或0.50%發(fā)酵銀杏葉對斜帶石斑魚血漿中AKP活性與T-CHO、TP含量均無顯著影響（P>0.05）。與對照組相比，飼料中添加0.25%發(fā)酵銀杏葉對血漿中AST活性沒有產(chǎn)生顯著影響（P>0.05）,但添加0.50%發(fā)酵銀杏葉則使血漿中AST活性顯著下降（P<0.05）；此外,飼料中添加0.25%或0.50%發(fā)酵銀杏葉均可顯著降低血漿中ALT活性(P<0.05)。

3 飼料中添加不同水平的發(fā)酵銀杏葉對斜帶石斑魚肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知,添加發(fā)酵銀杏葉的2個試驗組的肝臟SOD活性均顯著高于對照組(P<0.05),且肝臟SOD活性有隨發(fā)酵銀杏葉添加水平增加而升高的趨勢;肝臟GSH-Px活性隨著發(fā)酵銀杏葉添加水平的增加而顯著升高(P<0.05);肝臟CAT活性在發(fā)酵銀杏葉添加水平為0.50%時達到最高,顯著高于未添加發(fā)酵銀杏葉和發(fā)酵銀杏葉添加水平為0.25%時（P<0.05）；飼料中添加0.25%或0.50%發(fā)酵銀杏葉均使得肝臟MDA含量較對照組顯著降低（P>0.05）。

討論

逯巖等發(fā)現(xiàn)在團頭魴飼料中添加0.25%或0.50%發(fā)酵銀杏葉均能夠顯著提高團頭魴幼魚的增重率與特定生長率,并可降低飼料系數(shù)。而在本試驗中,在斜帶石斑魚飼料中添加0.25%或0.50%發(fā)酵銀杏葉,對其增重率、特定生長率、攝食率與成活率均未產(chǎn)生顯著影響。Tan等在石斑魚的高脂飼料中添加0.05%～0.40%銀杏葉提取物并未顯著改變其增重率、特定生長率、攝食率與成活率,與本試驗結(jié)果類似。這可能是由于石斑魚屬于肉食性魚類,飼料中會添加高比例的魚粉來提高飼料中蛋白質(zhì)的品質(zhì),使得石斑魚的生長性能達到較高水平,再提高較難,這說明發(fā)酵銀杏葉在石斑魚上呈現(xiàn)出的主要作用可能在于提高免疫能力或抗氧化能力方面,并且在0.25%與0.50%添加水平下不會對其生長性能產(chǎn)生負(fù)面影響。

血液中T-CHO的含量能夠在一定程度上揭示魚體脂類代謝的情況,反映肝臟的健康程度,當(dāng)魚體脂肪代謝紊亂、肝臟受到損傷時,血液中T-CHO的含量往往會升高,Yan等研究發(fā)現(xiàn),銀杏多糖能夠抑制非酒精性脂肪肝引發(fā)的代謝紊亂；Jeong等研究表明,銀杏葉提取物有減少脂類在肝臟過度沉積的作用；Tan等在珍珠龍膽石斑魚的高脂飼料中加入0.05%-0.20%銀杏葉提取物后,顯著降低了血液中甘油三酯（TG）、T-CHO與肝臟粗脂肪含量；而本試驗中,在斜帶石斑魚飼料中添加0.25%或0.50%發(fā)酵銀杏葉后,相比對照組,肝體比有降低的趨勢,血漿T-CHO含量有所下降,且有隨著添加水平的增加而降低的趨勢,但差異均未達到顯著水平,可能是本試驗中各試驗飼料中碳水化合物、粗脂肪等營養(yǎng)成分含量適中,故未形成顯著差異。此外,本試驗發(fā)現(xiàn),飼料中添加發(fā)酵銀杏葉有降低中血漿AKP活性、T-CHO與TP含量的趨勢,表明發(fā)酵銀杏葉中的活性成分有影響機體蛋白質(zhì)合成與脂肪代謝的作用,降低無機磷源的吸收與營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運效率，如果過量添加可能會影響魚體正常的生長發(fā)育。

AST與ALT是肝臟內(nèi)的2類重要的轉(zhuǎn)氨酶，在氨基酸的代謝中起重要作用,當(dāng)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)受到破壞時,AST與ALT作為肝細(xì)胞的胞內(nèi)酶,進入到血液中,所以血液中AST與ALT的活性可以代表肝臟的健康狀態(tài)。張碩等的研究發(fā)現(xiàn)藥用植物所含的黃酮類化合物具有抗四氯化碳（CCl4）致小鼠肝纖維化的作用，能夠顯著降低小鼠血液中AST與ALT活性,而黃酮類化合物又是發(fā)酵銀杏葉中的主要成分之一。本試驗中,在斜帶石斑魚飼料中添加0.25%的發(fā)酵銀杏葉時,血漿中AST活性相對對照組略有下降而ALT活性則顯著降低,發(fā)酵銀杏葉添加水平為0.50%時,血漿中AST與ALT活性相對對照組均顯著降低,說明發(fā)酵銀杏葉具有維持斜帶石斑魚肝臟細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)與功能的作用,但同時也降低了氨基轉(zhuǎn)移活力,這也是添加發(fā)酵銀杏葉未能提高斜帶石斑魚生長的原因之一。

機體中的SOD能夠催化超氧陰離子（O2-）歧化為過氧化氫（H2O2）和氧氣（O2）；GSH-Px是一種在還原過氧化物過程中起重要作用的酶,能夠降低過氧化物對機體的傷害；體內(nèi)產(chǎn)生的H2O2經(jīng)過CAT催化分解或利用,避免氧化損傷；MDA是具有細(xì)胞毒性的物質(zhì),是體內(nèi)過氧化過程的最終產(chǎn)物,其含量的升高反映體內(nèi)抗氧化能力。曹建等的研究表明,銀杏葉有降低血液MDA含量與提升SOD活性的作用；太海燕等的研究發(fā)現(xiàn),銀杏葉提取物可以通過降低肝臟MDA含量緩解小鼠的急性酒精性肝損傷,Niu等的研究表明在肉雞飼糧中添加發(fā)酵銀杏葉可以提升肝臟GSH-Px和SOD活性,從面提高肉雞肝臟的總抗氧化能力。本試驗數(shù)據(jù)顯示,攝食添加發(fā)酵銀杏葉飼料的斜帶石斑魚,其肝臟SOD、GSH-Px、CAT活性顯著高于對照組，MDA含量顯著低于對照組,且0.50%添加水平較0.25%添加水平作用更為明顯,表明發(fā)酵銀杏葉對于提升斜帶石斑魚清除自由基能力與抗氧化能力有顯著作用,這可能是銀杏葉中的有效生物活性成分黃酮類、銀杏多糖與萜類內(nèi)酯化合物共同發(fā)生作用的結(jié)果,其具體機制還有待進一步研究。

在我們前期的離體試驗中發(fā)現(xiàn),發(fā)酵銀杏葉對H2O2誘導(dǎo)的斜帶石斑魚肝細(xì)胞損傷具有顯著的保護作用,能夠顯著降低細(xì)胞上清液中AST與ALT的活性,并顯著提高細(xì)胞GSH-Px活性與總抗氧化能力,顯著降低細(xì)胞MDA含量,本試驗結(jié)果進一步印證了離體試驗的結(jié)果。

結(jié)論

飼料中添加發(fā)酵銀杏葉并未對斜帶石斑魚的生長性能產(chǎn)生負(fù)面影響,還能夠提高斜帶石斑魚的肝臟抗氧化能力,且添加水平為0.50%時效果優(yōu)于添加水平為0.25%時。

【產(chǎn)品特點】本品是專門針對水生動物的生理特性而設(shè)計的復(fù)合益生菌與復(fù)合酶制劑，特別是針對水生動物類消化系統(tǒng)的特點，采用原籍高活力乳酸菌，其抗逆性強，具有很強的活力，從而能夠達到滿意的使用效果。連續(xù)使用本品后能夠提高魚類的采食量和提高消化吸收率，不僅健康問題明顯減少，死亡淘汰率降低，且增長、增重效果非常明顯（對比數(shù)據(jù)顯示：相同的飼料和規(guī)格的草魚，連續(xù)使用本品后提前半月左右達到規(guī)定的重量），并且能夠改善魚類肉品質(zhì)，提高經(jīng)濟效益。

【性狀】灰白色或淡黃色粉末。

【適用范圍】高密度網(wǎng)箱養(yǎng)殖、高密度魚塘養(yǎng)殖、水庫養(yǎng)殖等各種水產(chǎn)動物，在四大家魚、羅非魚、海參、鮑魚、鰻魚、泥鰍、黃鱔、蝦類、龜鱉、蛙類等特種魚類養(yǎng)殖上均反饋效果明顯。廣泛適用于海水、淡水養(yǎng)殖。

【主要功效】

1.腸道保健功能：多種益生菌結(jié)合復(fù)合酶制劑維持魚類消化道菌群平衡，水生類動物健康問題明顯好轉(zhuǎn)，因為本品對水生動物的各種腸道問題有效果直觀的保健作用，增強水生動物細(xì)胞免疫反應(yīng)，提高抗應(yīng)激力。

2.促進消化吸收，降低飼料消耗：益生菌代謝產(chǎn)物中具有豐富的消化酶，可以提高飼料消化吸收率，使魚類充分利用飼料中的營養(yǎng)，促進魚類健康增長和增重效果顯著。

3.改善水質(zhì)：連續(xù)使用本品，可以降解養(yǎng)殖水體中的氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫等有害物質(zhì)，快速調(diào)節(jié)水質(zhì)，保持水質(zhì)“肥、活、嫩、爽”?？焖俜纸馑w中的殘餌、糞便、動植物殘骸等有機廢物，消除水體臭味異味，凈化水質(zhì)、改善水色、提高透明度、修復(fù)塘底、快速解毒，保持水環(huán)境生態(tài)平衡，有利于養(yǎng)殖品種生長發(fā)育。

4.使用本品后可有效減少或不使用抗生素，改善水生動物肉質(zhì)，提高成活率，養(yǎng)殖品種色澤好，活力強，整齊度高，肉質(zhì)好，能形成水生動物健康生態(tài)養(yǎng)殖模式，提高商品性能，生產(chǎn)健康安全的水生動物產(chǎn)品。

本品所用菌株穩(wěn)定性好，抗逆性強，具有耐熱、耐酸、耐膽汁、無污染、無違禁物質(zhì)、綠色環(huán)保的特點，可長期使用。

【用法用量】

1.喂粉狀飼料時，直接添加到飼料中；喂粒狀飼料時，可將本品1包加水2-5公斤溶解后與部分（50-100公斤）先飼喂，再飼喂未添加益生菌的飼料；或?qū)⑷芙獾囊嫔鸀⒃谌浚?00公斤）顆粒料上簡單混合一下后投喂。

2.喂濾食性水生動物或貝類，可將本品用養(yǎng)殖池塘水浸泡3小時以上（浸泡活菌的水最好加入1%的糖）直接潑撒；喂蛙類時由于是懸浮膨化飼料，需要將本品先放入5公斤清水中激活6小時以上（放入500g紅糖效果更好，激活24小時效果最佳），然后將激活的菌液灑在50-100公斤飼料中先飼喂，剩余的400-450公斤飼料正常飼喂，目的是將益生菌加入到其中。

3.拌料飼喂可以連續(xù)使用，水中潑灑使用時最好選擇晴天上午。

4.加入飼料中的用量：攝食量正常時每500公斤飼料使用本品1包（500g），攝食量低時、水質(zhì)比較惡化時、部分發(fā)病等情況時，每300公斤使用本品1包。

5.水中潑撒用量：正常量按200-300克/畝·米水深，水質(zhì)惡化時按400-500克/畝·米水深。

6.也可以將飼料發(fā)酵后飼喂，本品1包與500公斤蝦料+500公斤清水，發(fā)酵24-48小時進行飼喂，效果更好。其它飼料（除膨化飼料外）均可按照此方法發(fā)酵后飼喂。

【注意事項】

1.本產(chǎn)品無毒無害，飼料中有少量抗生素不會明顯影響本產(chǎn)品的使用效果，但不能與治療期間大劑量抗生素、消毒劑同時使用，否則會導(dǎo)致效果下降，但無副作用。

2.小水體高密度養(yǎng)殖（如蛙類養(yǎng)殖）水質(zhì)惡化臭味重，在結(jié)合添加本品的同時，結(jié)合使用我公司的“養(yǎng)殖場污水生物處理劑”或者“富養(yǎng)魚塘強力凈水劑”，即可很好地解決問題；高密度大區(qū)域養(yǎng)魚使用使用時，建議根據(jù)需要開增氧機。

3.開封后盡快用完，未用完需要扎口保存。 
如果出現(xiàn)使用本品效果不顯著請點擊這里閱讀——養(yǎng)殖使用微生物（益生菌）效果不明顯，可能是抗生素與化學(xué)消毒劑使用過量的因素

【規(guī)格】500g×30袋/箱，菌群綜合每克≥100億cfu/g。市場售價約22元/包

【保質(zhì)期】12個月(陰涼、干燥保存)。

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