動(dòng)物益生菌短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA制劑的制備及其益生特性評(píng)價(jià)
導(dǎo)讀
益生菌是一種能夠抑制有害菌生長(zhǎng)繁殖,改善腸道菌群平衡,促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收,提高宿主健康水平及飼料轉(zhuǎn)化率,無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)殘留、安全、無(wú)副作用的微生物添加劑。益生菌大體上可以分為三大類: 乳桿菌屬、雙歧桿菌屬及部分革蘭氏陽(yáng)性球菌,另外還包括明串球菌屬、丙酸桿菌屬、芽孢桿菌屬及部分益生真菌。益生菌作為飼料添加劑對(duì)動(dòng)物的促生長(zhǎng)作用已被廣泛認(rèn)可,但也存在著很多問(wèn)題,如適宜作為益生菌的菌種數(shù)量仍較少; 活菌制劑進(jìn)入動(dòng)物腸道后易受鹽酸、膽汁酸等影響,難以發(fā)揮較好的作用; 活菌制劑在加工、運(yùn)輸和貯存中易失去活性,使用效果降低等。其中,益生菌制劑活菌數(shù)量是其產(chǎn)品質(zhì)量和活性檢測(cè)的重要指標(biāo)之一,但極易受到吸附載體、溫度、制劑類型及貯存條件的影響,從而影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性和使用效果。有報(bào)道顯示,在40 ℃恒溫條件下貯存3個(gè)月,益生菌活菌數(shù)量可急劇下降5 個(gè)數(shù)量級(jí); 室溫條件下貯存24 個(gè)月,活菌數(shù)量下降不超過(guò)2 個(gè)數(shù)量級(jí); 低溫(0~4 ℃) 條件下存貯,活菌數(shù)量基本保持穩(wěn)定。如何制備穩(wěn)定的菌劑,使其能夠長(zhǎng)期貯存并保持其活菌數(shù)量,是目前益生菌制劑產(chǎn)業(yè)亟需解決的問(wèn)題之一。
短短芽胞桿菌(Brevibacillus brevis)是一種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌,其細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,蛋白分泌能力強(qiáng),不含內(nèi)毒素,在臨床和環(huán)境應(yīng)用方面安全,目前在生物防制、微生物保鮮及微生物降解等方面應(yīng)用廣泛,但關(guān)于其在益生菌方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。Che 等研究發(fā)現(xiàn),短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 首次被發(fā)現(xiàn)可以降低斷奶仔豬的料重比、腸道大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量,提高乳酸菌含量。但目前對(duì)利用該菌株制備益生菌劑的研究還未開(kāi)展,為獲得短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 益生菌制劑的最佳制備方法,本研究探索了穩(wěn)定劑、防腐劑、鹽濃度和pH 對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA制劑保存特性的影響、貯存過(guò)程中活菌數(shù)及抑菌能力變化,同時(shí)開(kāi)展了該菌株芽孢產(chǎn)率及耐熱性、抗生素敏感、抑菌及胃腸道環(huán)境耐受力的評(píng)估,旨在為擴(kuò)大其應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
1.1 材料
11.1 供試菌
株短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA由本實(shí)驗(yàn)室篩選鑒定; 靶標(biāo)菌株: 金黃色葡萄球菌( Staphylococcus aureus) 、大腸桿菌( Escherichia coli)及沙門氏菌( Salmonella) 均由福建省疾病預(yù)防控制中心提供。
1.1.2 培養(yǎng)基
發(fā)酵培養(yǎng)基: 豆餅粉3%、蔗糖2%、可溶性淀粉0.8%、CaCl20.5%、蛋白胨0.2%,pH7.0~7.2,由實(shí)驗(yàn)室自行配制。
1.1.3 溶液配制
人工胃液: 在約800 mL 水中加入稀鹽酸16.4 mL,加入10 g 胃蛋白酶( 10 000 NFU/mg) 搖勻,加水稀釋成1 000 mL,調(diào)pH 至3.0,用0.22 μm 無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌待用; 人工腸液: 磷酸二氫鉀6.8 g,加500 mL 水溶解,用0.1 mol /L 氫氧化鈉溶液調(diào)pH 至6.8,另取胰蛋白酶( 250 NFU/mg) 1g,加適量水溶解,兩液混勻后,加水稀釋至1 000 mL,0.22 μm 無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌待用。
1.2 方法
1.2.1 不同穩(wěn)定劑對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA
貯存的影響將黃原膠、瓊脂、海藻酸鈉、海藻酸鉀、海藻酸銨、卡拉膠、羧甲基纖維素鈉、海藻酸丙二醇酯8 種穩(wěn)定劑( 終濃度為2.0‰) 分別與發(fā)酵液混合,室溫放置3 d 后,觀察制劑外觀形態(tài)并測(cè)定穩(wěn)定性。將初篩得到的穩(wěn)定劑進(jìn)行復(fù)篩,使其終濃度為0.5‰、1.0‰、1.5‰、2.0‰,室溫放置3 d 后,觀察制劑外觀形態(tài)并測(cè)定穩(wěn)定性。
1.2.2 不同NaCl 濃度對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA保存特性的影響
分別取100 mL 發(fā)酵液于150 mL 三角瓶中,添加0、2%、4%、6%、8%和10%NaCl,以不加NaCl 為對(duì)照。分別在0、5、10、15、20、25、30 d 取樣,稀釋后涂布于NA 平板,重復(fù)3 次,30℃培養(yǎng)48 h,統(tǒng)計(jì)活菌數(shù),計(jì)算存活率及雜菌率。存活率( %) = Nt/N0×100%,式中,Nt,貯存不同時(shí)間的活菌數(shù); N0,0 d 的活菌數(shù); 雜菌率( %) = 雜菌數(shù)/( 短短芽胞桿菌數(shù)+雜菌數(shù)) ×100%。
1.2.3 不同pH 對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 保存特性的影響
分別取100 mL 發(fā)酵液于150 mL的三角瓶中,在pH 分別為1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 和11.0 下常溫保存,分別在0、5、10、15、20、25、30 d 取樣,稀釋后涂布于NA 平板,重復(fù)3 次,30 ℃ 培養(yǎng)48 h,統(tǒng)計(jì)活菌數(shù),計(jì)算存活率及雜菌率。
1.2.4 不同防腐劑對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA保存特性的影響
分別取100 mL 發(fā)酵液于150mL 的三角瓶中,分別添加終濃度為0.1‰的雙乙酸鈉、苯甲酸、苯甲酸鈉、丙酸銨、山梨酸、山梨酸鉀、山梨酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸鈣11種防腐劑,對(duì)照組不添加任何防腐劑,常溫保存,分別在0、5、10、15、20、25、30 d 取樣,稀釋后涂布于NA 平板,重復(fù)3 次, 30 ℃培養(yǎng)48 h,統(tǒng)計(jì)活菌數(shù),計(jì)算存活率及雜菌率。
1.2.5 長(zhǎng)期貯存過(guò)程中膠懸劑活菌數(shù)及抑菌能力的變化
取200 mL 發(fā)酵液于250 mL 藍(lán)口瓶中,添加0.1‰檸檬酸鈣、2‰黃原膠,并分別添加0、3%、6%、9%、12%、15%NaCl,調(diào)節(jié)pH 為7.0,常溫保存,分別于0、10、30、60、90、120、150、180、210、240、270、300 d 取樣。稀釋后涂布于NA 平板,重復(fù)3次, 30 ℃培養(yǎng)48 h,統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)。同時(shí),取10、60、120、180、300 d 進(jìn)行抑菌效果檢測(cè)。
1.2.6 短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 的體外益生效果
1.2.6.1 菌懸液制備
將菌株活化2 次后接種于NA 液體培養(yǎng)基中,30 ℃、170 r /min 下振蕩培養(yǎng)48 h,置于80 ℃水浴15 min,7 000 g 離心10 min,收集菌體; 采用PBS 緩沖液洗滌2 次,并用PBS 緩沖液懸浮即為菌懸液。
1.2.6.2 產(chǎn)芽孢率及耐熱性
將菌株活化2 次后接種于NA 液體培養(yǎng)基中,30 ℃、170 r /min 振蕩培養(yǎng),分別在24、48、72 h 取樣,測(cè)定產(chǎn)芽孢率; 取菌懸液1 mL,加入到9 mL PBS 溶液中,充分混勻后,100℃加熱0、2、5、10、15、20、30 min 后,以無(wú)菌生理鹽水按1 ∶ 10 梯度稀釋,進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)并計(jì)算存活率。
1.2.6.3 人工胃腸液及膽鹽耐受性
取菌懸液1mL 加入到9 mL 人工胃液及人工腸液中,充分混勻后, 37 ℃、170 r /min 振蕩培養(yǎng)3 h,分別于0、3 h 取樣,以無(wú)菌生理鹽水按1 ∶ 10 梯度稀釋,進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)并計(jì)算存活率。在LB 液體培養(yǎng)基中加入0.3%( W/V) 的豬膽鹽,121 ℃滅菌20 min。取1 mL菌懸液于培養(yǎng)基中,37 ℃、170 r /min 振蕩培養(yǎng)24 h,分別于0、24 h 取樣,將無(wú)菌生理鹽水按1 ∶ 10 梯度稀釋,進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)并計(jì)算存活率。
1.2.6.4 抑菌作用及抗生素敏感性
將100 mL09% NA 培養(yǎng)基熔化并冷卻到50 ℃后,加入100 μL菌濃度為1×107CFU/mL 指示菌株發(fā)酵液,渦旋震蕩后傾覆在預(yù)先已凝固的NA 下層培養(yǎng)基上。靜置數(shù)分鐘后,在雙層培養(yǎng)基平板上打孔,分別向每個(gè)孔內(nèi)加入無(wú)菌水及發(fā)酵上清液各100 μL,以無(wú)菌水為空白對(duì)照, 37 ℃培養(yǎng)24 h,重復(fù)3 次,觀察菌株生長(zhǎng)情況并測(cè)量抑菌圈直徑。
1.2.6.5 抗生素敏感試驗(yàn)
將含有定量抗生素的濾紙片( 頭孢唑林30 μg /片、氨芐西林10 μg /片、慶大霉素10 μg /片、紅霉素15 μg /片、氯霉素30 μg /片、鏈霉素10 μg /片、四環(huán)素30 μg /片、利福平5 μg /片、新霉素30 μg /片、多黏菌素B 30 μg /片)貼在已接種了短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 的NA培養(yǎng)基上, 30 ℃培養(yǎng)24 h,重復(fù)3 次,觀察生長(zhǎng)情況并測(cè)量抑菌圈直徑。
1.3 數(shù)據(jù)分析
所有數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010 和SPSS 17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,One-Way ANOVA 進(jìn)行單因素方法分析,Duncan 氏法進(jìn)行多重比較,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以P<0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。
2結(jié)果
2.1 短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 膠懸劑的制備
2.1.1 穩(wěn)定劑對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 膠懸劑的影響
由圖1 可知,將2.0‰穩(wěn)定劑與發(fā)酵液混合,室溫放置3 d 后發(fā)現(xiàn),黃原膠與瓊脂膠懸效果最好,無(wú)上下分層,穩(wěn)定性良好。對(duì)黃原膠和瓊脂進(jìn)行復(fù)篩發(fā)現(xiàn),1.0‰、1.5‰、2.0‰黃原膠質(zhì)地均勻,無(wú)上下分層,穩(wěn)定性良好,其中2‰黃原膠沉淀率最高為26.89%,穩(wěn)定性最好; 0.5‰、1.0‰、1.5‰、2.0‰瓊脂均出現(xiàn)結(jié)塊分層現(xiàn)象( 圖2) 。因此,選用2.0‰黃原膠為穩(wěn)定劑以保證膠懸劑的穩(wěn)定性。
2.1.2 NaCl 濃度對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA膠懸劑的影響
由圖3 可知,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),活菌數(shù)呈遞減的趨勢(shì)。當(dāng)發(fā)酵液NaCl 濃度為4%時(shí),短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 初始活菌數(shù)為2.43×107CFU/mL,保存5、10、15、20、25、30 d 時(shí),活菌數(shù)顯著下降( P<0.05) ,分別為44.31%、55.14%、39.64%、28.26%、16.05%、22.63%,30 d 時(shí)活菌數(shù)量高于其他NaCl 濃度且無(wú)雜菌。考慮到發(fā)酵液存放期間盡可能保持活菌數(shù)和減少雜菌率,選擇4%NaCl 進(jìn)行長(zhǎng)期存放。
2.1.3 pH對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 膠懸劑的影響
由圖4 可知,當(dāng)pH 調(diào)至1.0 時(shí),在保存30 d 后,活菌數(shù)顯著下降為0.53 × 107CFU/mL( P<0.05) ,但存活率仍為15.01%,說(shuō)明短短芽胞桿菌FJA-1501-BPA 在強(qiáng)酸條件也能生存; 將發(fā)酵液pH調(diào)至3.0 時(shí),活菌數(shù)較多,當(dāng)發(fā)酵液pH 調(diào)至5.0、7.0、9.0、11.0 處理30 d 后,活菌數(shù)分別為2.53×107、1.00×107、0.57×107、1.77×107CFU/mL; 當(dāng)pH 調(diào)至7.0時(shí),貯存10 d 時(shí),其活菌數(shù)最多,顯著高于貯存0、5、15、20、25 和30 d( P<0.05) ,綜合考慮細(xì)胞滲透壓平衡和貯存時(shí)間,最終選擇將發(fā)酵液pH 調(diào)至7.0 時(shí)進(jìn)行長(zhǎng)期存放,盡可能保持活菌數(shù)和減少雜菌率。
2.1.4 防腐劑對(duì)短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 膠懸劑的影響
由表1 可知,在處理30 d 后,不同防腐劑處理組的活菌數(shù)略有不同,但活菌數(shù)均在1×106CFU/mL 以上且無(wú)污染雜菌。這可能是短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 自身產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)對(duì)其控制雜菌污染產(chǎn)生作用。因此,選擇0.1‰雙乙酸鈉、0.1‰山梨酸鉀、0.1‰檸檬酸鈣添加于發(fā)酵液中,進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
2.2 長(zhǎng)期貯存過(guò)程中短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 活菌數(shù)及抑菌能力變化
2.2.1 活菌數(shù)
隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),活菌數(shù)略有增加,其結(jié)果見(jiàn)表2。由表2 可知,初始第0 天,鹽濃度為0、3%、6%、9%、12%、15%時(shí)的活菌數(shù)分別為8.08、8.10、8.10、8.08、8.07、8.08 log( CFU/mL) ; 保存300 d后,活菌數(shù)分別為8.76、8.62、8.70、8.67、8.46、8.52 log( CFU/mL) 。同一濃度保存不同時(shí)間,活菌數(shù)顯著升高( P<0.05) ,但總體來(lái)說(shuō),添加一定量的NaCl 有利于短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA的長(zhǎng)期貯存。
2.2.2 抑菌能力
由表3 ~ 5 可知,同一NaCl 濃度下,隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng),該菌株對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的抑菌活性有所降低,但不同的鹽濃度對(duì)長(zhǎng)期貯存后的抑菌活性影響不大,因而制備菌劑時(shí),選擇4% NaCl 進(jìn)行貯藏。
2.3 短短芽胞桿菌膠懸劑益生特性評(píng)價(jià)
2.3.1 發(fā)酵水平
由表6 可知,短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 在發(fā)酵72 h 時(shí),孢子數(shù)顯著高于發(fā)酵24 及48 h( P<0.05) ,發(fā)酵24、48 及72 h 產(chǎn)孢率分別是0.87%、7.58%、60.82%,說(shuō)明該菌株具有良好的產(chǎn)芽孢能力。
2.3.2 耐熱性
由表7 可知,在100 ℃加熱0、2、5、10、15、20、30 min 后,菌株耐熱率分別為100.00%、36.41%、12.66%、1.97%,加熱15、20、30min 后,菌株耐熱率均<1%,加熱30 min 后活菌數(shù)仍達(dá)到3.06 log( CFU/mL) ,說(shuō)明該菌株具有一定的耐熱性。
2.3.3 人工胃腸液和豬膽鹽耐受性
由表8 可知,短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 在人工胃液中保持3 h 后存活率為23.16%,活菌數(shù)量有一定的降低,說(shuō)明其對(duì)人工胃液中具有一定的耐受性; 在人工腸液中作用3 h 后,其存活率達(dá)到48.62%,說(shuō)明該菌株對(duì)人工腸液具有良好的耐受性; 該菌株在豬膽鹽環(huán)境中耐受性最好,在0.3%( W/V) 的豬膽鹽環(huán)境中培養(yǎng)24 h 后,菌株生長(zhǎng)良好,存活率達(dá)到98.83%。
2.3.4 抑菌譜
由圖5 可知,該菌株對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌的抑菌圈直徑分別為21.42、21.33、15.83 mm,說(shuō)明,該菌株對(duì)動(dòng)物病原菌具有較好地抑制作用。
2.3.5 抗生素敏感性
由圖6 可知,短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 對(duì)紅霉素、頭孢唑林和慶大霉素極度敏感,其抑菌圈大小均達(dá)20 mm,對(duì)新霉素、利福平、氯霉素、四環(huán)素和多黏菌素B 高度敏感,抑菌圈直徑為15~20 mm; 對(duì)鏈霉素中度敏感,抑菌圈直徑為10.1~15.0 mm; 對(duì)氨芐西林為耐藥。
3討論
延長(zhǎng)益生菌制劑的保質(zhì)期,控制雜菌率有多種方法,如控制溫度、pH、鹽度及添加防腐劑等。菌活力強(qiáng)、活菌數(shù)量大,才能有效維持胃腸道微生物生態(tài)環(huán)境平衡,發(fā)揮最大的益生作用。郭照輝在進(jìn)行畜禽用凝結(jié)芽孢桿菌( Bacillus coagulan) 液體菌劑雜菌控制及保存期初步研究時(shí),在凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液中添加0.5%苯甲酸鈉,調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH 為4.0,置陰涼干燥處常溫保存270 d 發(fā)現(xiàn),菌株存活率為40.06%,凝結(jié)芽孢桿菌是一種同型乳酸發(fā)酵的綠色微生物飼料添加劑,在酸性條件下( pH 4.0) ,凝結(jié)芽孢桿菌孢子對(duì)熱幾乎沒(méi)有耐受性,而且生長(zhǎng)受到抑制。而短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 在pH 3.0 ~ 15.0 時(shí)均能生長(zhǎng),其生長(zhǎng)的pH 范圍比目前報(bào)道的益生菌菌株更廣,因而可能更適合作為益生菌菌株進(jìn)行應(yīng)用。此外,本研究選擇使用0.1‰檸檬酸鈣、0.1‰山梨酸鉀、0.1‰雙乙酸鈉3 種防腐劑組合并且添加4% NaCl,為增強(qiáng)產(chǎn)品的穩(wěn)定劑還添加了2.0‰黃原膠,常溫保存300 d 時(shí),菌株存活率為100%,明顯優(yōu)于郭照輝研究結(jié)果。因此,本研究提供了一種益生菌液體制劑保存的新方法,可以延長(zhǎng)菌劑的貯藏時(shí)間,便于運(yùn)輸。
芽孢桿菌作為益生菌飼料添加劑的核心組成成分,其自身益生效果的優(yōu)劣是決定后期發(fā)酵產(chǎn)品最終應(yīng)用效果的關(guān)鍵因素。產(chǎn)芽孢率高、耐熱性強(qiáng)且能在工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)后保持一定數(shù)量的活菌是作為益生菌條件之一。王巧麗等研究發(fā)現(xiàn),豬源益生羅伊氏乳桿菌在70 ℃水浴培養(yǎng)2 min 時(shí)菌株基本死亡,而高書(shū)鋒等研究發(fā)現(xiàn),凝結(jié)芽孢桿菌W-02 益生菌在80 ℃水浴30 min,活菌數(shù)為1×105~1×106CFU/mL。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 在100 ℃ 水浴加熱30 min,活菌數(shù)仍為3.06 log( CFU/mL) ,由此可知,短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 耐熱性優(yōu)于乳酸桿菌,可以保證其發(fā)酵后存活足夠數(shù)量的菌體。胃酸和膽汁具有抗菌作用,益生菌只有能夠抵御低pH 和高膽汁鹽時(shí)才能在腸道內(nèi)存活并正常發(fā)揮生理作用。短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 在人工胃液、腸液、0.3%豬膽鹽培養(yǎng)3、3、24 h 后菌株存活率分別為23.16%、48.62%、98.83%,其在人工胃腸液中存活率雖較低但不致死。閔鐘熳等發(fā)現(xiàn),芽孢桿菌B5329、B22、B544,在人工胃液中處理4 h,存活率分別為12.02%、7.94%、6.03%,在人工腸液、0.3%豬膽鹽中存活率維持在較高的水平。本試驗(yàn)中短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 與上述3 株芽胞桿菌一樣具有耐胃腸液及膽鹽能力,能夠在腸道內(nèi)存活。維持腸道微生態(tài)平衡是益生菌的作用之一,故益生菌菌株要具備抑制病原菌的特性。短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的抑菌圈直徑分別為21.42、21.33、15.83mm,與李善仁等的研究結(jié)果一致,其發(fā)現(xiàn)3 株芽孢桿菌作為益生菌對(duì)腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的平均抑菌圈直徑分別為15.56、15.50、23.55mm。以目前畜牧養(yǎng)殖現(xiàn)狀來(lái)看,不同動(dòng)物的不同生長(zhǎng)階段還需要添加一定量的抗生素,所以需要考慮抗生素與益生菌是否存在協(xié)同作用。短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 對(duì)鏈霉素、氨芐西林不敏感; 而對(duì)紅霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、新霉素、利福平、氯霉素、四環(huán)素和多黏菌素B 均較敏感。李雅麗等發(fā)現(xiàn)6 株芽孢桿菌對(duì)鏈霉素、氨芐西林等10 種常用飼用抗生素均較敏感,建議避免與抗生素同時(shí)使用。短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 可能攜帶了鏈霉素、氨芐西林耐藥性基因,該菌株與此類抗生素可以在飼料中同時(shí)添加,互不影響。
4結(jié)論
添加4%NaCl、0.1‰檸檬酸鈣、0.1‰山梨酸鉀、0.1‰雙乙酸鈉、2.0‰黃原膠,調(diào)節(jié)pH 為7,可獲得長(zhǎng)期保存的短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 膠懸劑配方,有望為益生菌液體制劑的制備提供新的方法。短短芽胞桿菌FJAT-1501-BPA 對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌3 種腸道病原菌具有抑制作用,具有產(chǎn)孢率高、耐熱性強(qiáng)、耐酸、耐膽鹽的特性,可與鏈霉素、氨芐西林同時(shí)使用,具備了優(yōu)良益生菌的條件。
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